INSTRUCTION MANUAL - BEDIENUNGSANLEITUNG PERFECTBLUE VERTICAL DOUBLE GEL SYSTEMS / VERTIKALE DOPPELGELSYSTEME - TWIN S, M, L & TWIN EXW S - VWR
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Instruction Manual – Bedienungsanleitung PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems / Vertikale Doppelgelsysteme Twin S, M, L & Twin ExW S
Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
CONTENTS
SHORT INSTRUCTION 2
WARRANTY 4
SAFETY PRECAUTIONS 4
PACKAGING LIST 5
SYSTEM OVERVIEW 6
Technical properties 6
GENERAL INSTRUCTIONS 7
Leak proof sealing of glass plates 7
Assembling the system and electrophoresis 9
Cleaning 10
REQUIRED MATERIALS & RECIPES 11
Required gel volumes 11
Required buffer volumes 11
Tris-Glycine SDS-PAGE 11
Tris-Tricine SDS-PAGE 12
TROUBLESHOOTING 13
TECHNICAL SUPPORT AND ORDERING INFORMATION 15
Power Supplies 15
PerfectBlue™ Double Gel System Twin S 15
PerfectBlue™ Double Gel System Twin M 16
PerfectBlue™ Double Gel System Twin L 16
PerfectBlue™ Double Gel System Twin ExW S 17
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Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
SHORT INSTRUCTION
Systems overview
1. Upper buffer chamber (UBC)
with side clamps and electrodes
2. Safety lid with power cords 1
3. Lower buffer chamber (LBC) 2
4. Casting base
3
4
Leak proof sealing of glass plates
Invert casting base, so the black silicone mats face down-
ward and the acrylic square upward.
Place UBC on inverted casting base. Arrange gel assem-
blies and place on each side of the UBC. It is important that
the bottom of the glass plates and the spacers sit flat on the
acrylic square of the inverted casting base. Tighten side
clamps. Tighten the blocking plate in a similar way at the
other side of the UBC in case of casting only one gel.
Invert casting base and turn out the cams.
Wet the silicone mats with e.g. water or
buffer to prolong their life span.
Place UBC on the gaskets and turn the
handles at the same time, half a turn.
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Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems Assembling the system and electrophoresis The gel can now be poured. Pour slowly to avoid bubbles. After polymerization, lift UBC from casting base and place into the LBC. Add buffer to the UBC. Load the samples. Add buffer to the LBC. Place safety lid onto the unit and start the run. After the run is completed turn off the power supply and remove lid. Lift UBC from LBC, loosen side clamps to remove gel assembly for further analysis. VWR_v0617_E 3
Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems WARRANTY VWR guarantees that the vertical electrophoresis system you have received has been thoroughly tested and meets its published specification. However, immediately upon arrival, please check carefully that the shipment is complete and has not been damaged in transit. For missing parts or to report any kind of damage, please contact VWR (see 'TECHNICAL SUPPORT AND ORDERING INFORMATION'). Please retain all packaging materials until the delivery has been completely checked since this will speed up the return of goods if required and reduce environmental impact. Any form of returns, replacements or credit notes must be agreed in advance by VWR. For the complete range of PerfectBlue™ electrophoresis and blotting systems, VWR guarantees a warran- ty period of 36 months if the products have been used solely according to the instruction manual unless a different warranty has been offered in writing. No liability is accepted for loss or damage arising from incorrect use. VWR's liability is limited to the repair or replacement of the unit or refund of the purchase price, at VWR's discretion. VWR is not liable for any consequential damages. After the warranty period has expired VWR can offer repairs. VWR reserves the right to alter the technical specifications of the PerfectBlue™ electrophoresis or blotting systems without prior notice. This will enable us to implement developments as soon as they arise. SAFETY PRECAUTIONS Please, read this Instruction Manual carefully before using the gel system. Only use a CE marked DC power supply. Always disconnect the system from the power supply before removing the safety lid. Always disconnect the gel system from the power supply when it is not in use or before moving it. Running conditions for this unit should not exceed the maximum operating voltage or current. The flow rate for cooling should not exceed 2 liter per minute if the chamber is connected to a water tab. If using a water circulator the flow should not exceed 12 liter per minute. VWR_v0617_E 4
Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
PACKAGING LIST
Unless requested otherwise, the following items are included in shipment for the models Twin S, Twin M,
Twin L and Twin ExW S:
Twin S (PEQL45-1010-I) Twin M (PEQL45-1614-I)
Upper buffer chamber with electrodes Upper buffer chamber with electrodes
Lower buffer chamber Lower buffer chamber
Safety Lid with power cords Safety Lid with power cords
4 blank glass plates 4 blank glass plates
2 notched glass plates 4 notched glass plates
2 notched alumina ceramic plates 4 clamp assemblies
4 clamp assemblies 2 combs, 1.5 mm thick, 10 teeth
2 combs, 0.8 mm thick, 10 teeth 2 combs, 1.5 mm thick, 15 teeth
4 side spacers, 0.8 mm thick 8 side spacers, 1.5 mm thick
2 bottom spacers, 0.8 mm thick 4 bottom spacers, 1.5 mm thick
2 replacement gaskets 2 replacement gaskets
4 replacement spring pegs 4 replacement spring pegs
1 blocking plate for single gel operation 1 blocking plate for single gel operation
1 SpacerPlacer for easy spacer alignment 1 SpacerPlacer for easy spacer alignment
Twin S (PEQL45-1010-C) Twin M (PEQL45-1614-C)
as the PEQL45-1010-I but including casting base as the PEQL45-1614-I but including casting base
Twin ExW S (PEQL45-2010-I) Twin L (PEQL45-2020-I)
Upper buffer chamber with electrodes Upper buffer chamber with electrodes
Lower buffer chamber Lower buffer chamber
Safety Lid with power cords Safety Lid with power cords
4 blank glass plates 4 blank glass plates
4 notched glass plates 4 notched glass plates
4 clamp assemblies 4 clamp assemblies
2 combs, 0.8 mm thick, 15 teeth 2 combs, 1.5 mm thick, 15 teeth
2 combs, 0.8 mm thick, 20 teeth 2 combs, 1.5 mm thick, 20 teeth
8 side spacers, 0.8 mm thick 8 side spacers, 1.5 mm thick
4 bottom spacers, 0.8 mm thick 4 bottom spacers, 1.5 mm thick
2 replacement gaskets 2 replacement gaskets
4 replacement spring pegs 4 replacement spring pegs
1 blocking plate for single gel operation 1 blocking plate for single gel operation
1 SpacerPlacer for easy spacer alignment 1 SpacerPlacer for easy spacer alignment
Twin ExW S (PEQL45-2010-C) Twin L (PEQL45-2020-C)
as the PEQL45-2010-I but including casting base as the PEQL45-2020-I but including casting base
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Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
SYSTEM OVERVIEW
PerfectBlue™ vertical double gel systems Twin S, M, L and ExW S are characterized by sophisticated
design and durable construction. With their unique arrangement of 3 cathodes and an extended anode
surrounding the complete base of the electrophoresis chamber, electrophoretic separations of excep-
tional high quality can be achieved. All of the systems are equipped with an alumina ceramic cooling
system for water circulation matching effective cooling and high migration rates without negatively
affecting separation results. Using the casting system developed for the PerfectBlue™ vertical double gel
systems up to 2 gels can get poured at once, conveniently and without leakage. Designed for conven-
ience, the glass plates do not have to be re-assembled after polymerization and electrophoresis can
performed straight away. This time saving step further eliminates potential sources of error.
PerfectBlue™ vertical double gel systems are available in 4 different formats, each one including a wide
range of accessories for increased versatility. The systems are constructed using solid parts, precisely
machined from 0.6 mm thick acrylic by CNC milling. The use of specialized adhesives neutralizes
mechanical forces and thermal expansions making the system durable and reliable. We are therefore
confident of our guarantee, a full 3 year warranty on the whole range of PerfectBlue™ electrophoresis
and blotting equipment.
Upper buffer chamber (UBC)
with side clamps and electrodes Safety lid with power cords
Lower buffer chamber (LBC) Casting base
Technical properties
PerfectBlue™ Cat. No. Gel size required buffer maximal max. current typical
(W x L) volume Voltage per gel running time
10 x 10
Twin S PEQL45-1010-I/C 250 ml up to 500 V 15 - 35 mA 30 - 90 min
cm
16 x 14
Twin M PEQL45-1614-I/C 650 ml up to 500 V 15 - 50 mA 60 - 120 min
cm
20 x 20
Twin L PEQL45-2020-I/C 1250 ml up to 500 V 15 - 75 mA 60 - 180 min
cm
20 x 10
Twin ExW S PEQL45-2010-I/C 650 ml up to 500 V 30 - 45 mA 30 - 90 min
cm
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Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems GENERAL INSTRUCTIONS Leak proof sealing of glass plates When casting acrylamide gels, we recommend using the upper buffer chamber (UBC) for the fixation of glass plates and the casting base for plate sealing. The casting base is included in delivery or can be purchased separately. In addition the Cast-It™ gel caster is available for sealing glass plates and pour- ing gels while the upper buffer chamber is used for electrophoresis. (see 'TECHNICAL SUPPORT AND ORDERING INFORMATION'). 1. The upper buffer chamber (UBC) is attached to the lower buffer chamber (LBC) with a safety interlocking pin and slot arrangement. The UBC may be removed for cleaning by sliding the pin out of the slot in the center fixture of the LBC and lifting it out. For casting the gel remove the UBC and loosen the black knobs and slide the side clamps sideways to the outermost position. The clamps will remain in place once positioned due to the spring design. 2. Invert the casting base so that the black silicone mats face downward. Inverting the casting base is essential for proper alignment of glass plates and spacers before clamping them inside the UBC assuring perfect sealing later on. 3. Place the UBC flat on the inverted casting base. Arrange a gel assembly including a notched glass plate, side spaces and blank glass plate onto the gasket of one side of the UBC, making sure to place the notched plate next to the gasket (this will allow buffer access to the gel during operation). Make sure that the bottom of the glass plates and the spacers sit flat on the acrylic squares of the inverted casting base. The usage of the Spacer Placer facilitates the arrangement of the spacers. Slide the side clamps over the assembly until the gasket of the UBC is slightly flattened by the glass plates (do not over tighten). Place a second gel assembly or the blocking plate on the oth- er side to create the upper buffer reservoir. VWR_v0617_E 7
Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
4. After aligning and clamping the glass plate assem-
bly the UBC will be removed and the casting base
has to be turned around so that the black silicone
mats are facing upward. Wet the silicone mats with
e.g. water or buffer to prolong their life span.
5. Place the UBC onto the casting base.
Insert the casting cams (with handles
pointing up) into the holes in the UBC.
Simultaneously turn cams one half turn
to tighten the assembly onto the silicone
gaskets of the casting base. The eccen-
tric effect of the cams presses the UBC
and therefore the lower angles of the
glass plates downward onto the silicone
mats of the casting base.
6. Once the glass plates are secured into the casting
base, the gel may be poured. Take care to avoid air
bubbles while pouring the gel. Immediately after the
gel is poured insert an appropriate comb for the crea-
tion of wells.
There is no need to apply the casting base when using
pre-cast gels. Since glass or plastic plates of pre-cast
gels are often very thin take care not to over tighten the
side camps when fixing the gel assembly into the UBC.
VWR_v0617_E 8Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems Assembling the system and electrophoresis 1. To reassemble, place the upper buffer chamber (UBC) into the lower buffer chamber (LBC) on the open side of the slot in the center fixture of the LBC. Slide the UBC towards the center of the LBC until the pins lock into the slot. This interlocking pin and slot arrangement guaran- tees a tighter fit of the UBC in the LBC and allows a re- producibility of the electric conditions. 2. For cooling through a cold water tap or recirculator chiller, flexible lab tubing can get attached to each hose barb on the UBC marked as 'in' and 'out'. The inner di- ameter of the adapters of the integrated cooling system is 6 mm, the outer diameter is 9 mm. Note the marks indicating 'in' and 'out' at the adapters to assure the right flow direction. Water flow should not exceed 2 L per minute for the water tap and 12 L per minute for the recirculator. 3. Add electrophoresis buffer to the UBC to approximately 5 mm from the top of the gel assemblies, making sure the level is above the gap formed by the 'ears' of the notched plate. Be sure that no buffer is leaking from the UBC to the LBC. 4. Remove comb and rinse wells with buffer. Load samples onto the gel. 5. Add buffer to the LBC to approximately 2-3 mm above the base of the gel. The open bottom end of the gel assembly should be in contact with buffer in order for electrophoresis to take place. 6. Set the safety lid onto the unit. Because of its asymmetrical design this will only work in the proper orientation, con- necting the electrode of the lower buffer reservoir (typical- ly the anode) with the red power cord and the electrodes of the upper buffer reservoir (typically the cathodes) with the black power cord. VWR_v0617_E 9
Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
7. For cooling, turn on the water and allow it to circulate
through the system. Water flow should not exceed 2 L
per minute for the water tap and 12 L per minute for the
recirculator.
8. When water has started to circulate through the system,
connect the power cords to a power supply (red to red
and black to black) and start the run by defining an
appropriate voltage or current (see 'Technical proper-
ties').
9. Turn off power supply and water after the electrophore-
sis is complete.
10. Remove the lid by pushing on the acrylic thumb pegs
protruding through the lid on the top of the unit. Slide
and lift UBC from LBC and drain buffer chambers sepa-
rately.
11. Loosen side clamps and remove gel assemblies to further proceed with analysis.
Cleaning
Lower buffer chamber, upper buffer chamber, silicone gaskets of the casting base, glass plates, spacers
and combs should get cleaned thoroughly under running water after use. Use a mild detergent to get rid
of any debris then rinse with distilled water to avoid formation of salt spots. It is recommended to allow
the chamber to air dry rather than drying with a towel to avoid damage to the electrode wires. Each
part should get completely dry before storage.
Do not use ethanol or other organic solvents to clean acrylic products, because organic solvents cause
acrylic to 'craze' or crack!
VWR_v0617_E 10Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
REQUIRED MATERIALS & RECIPES
Required gel volumes
These volumes have been calculated for glass plates and spacers available at VWR.
PerfectBlue™ double gel system Twin S Twin M Twin ExW S Twin L
0.8 mm Spacer 8 ml 18 ml 16 ml 32 ml
1.5 mm Spacer 15 ml 34 ml 30 ml 60 ml
Required buffer volumes
PerfectBlue™ double gel system Twin S Twin M Twin ExW S Twin L
250 ml 650 ml 650 ml 1250 ml
Tris-Glycine SDS-PAGE
10 x Tris-Glycine electrophoresis buffer
30 g/l Tris-Base [0.25 M]
144 g/l Glycine [1.92 M]
10 g/l SDS [1 %, w/v]
Adjust volume to 1 L using distilled H2O
Resolving gels for Tris-Glycine SDS-PAGE
6% 8% 10 % 12 % 15 %
H2 O 5.3 4.6 4.0 3.3 2.3
30 % Acrylamide mix 2.0 2.7 3.3 4.0 5.0
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
10 % SDS 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
10 % Ammonium persulfate (APS) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
TEMED 0.008 0.006 0.004 0.004 0.004
All amounts in ml per 10 ml gel solution
5 % Stacking gels for Tris-Glycine SDS-PAGE
1 ml 2 ml 3 ml 5 ml 10 ml
H2 O 0.68 1.4 2.1 3.4 6.8
30 % Acrylamide mix 0.17 0.33 0.5 0.83 1.7
1.0 M Tris-HCl (pH 6.8) 0.13 0.25 0.38 0.63 1.25
10 % SDS 0.01 0.02 0.03 0.05 0.1
10 % Ammonium persulfate (APS) 0.01 0.02 0.03 0.05 0.1
TEMED 0.001 0.002 0.003 0.005 0.01
All amounts in ml
VWR_v0617_E 11Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
3 x Sample buffer for Tris-Glycine SDS-PAGE
1.75 ml 1 M Tris-HCl pH 6.8
1.5 ml Glycerine
5 ml SDS (10 %)
0.5 ml -Mercaptoethanol
1.25 ml Bromophenol blue
Tris-Tricine SDS-PAGE
1 x Tris-Tricine electrophoresis buffer
Cathode buffer 12.11 g/l Tris-Base [0.1 M]
17.92 g/l Tricine [0.1 M]
1 g/l SDS [0.1 %, w/v]
Adjust volume to 1 L using distilled H2O
Anode buffer 0.2 M Tris-HCl, pH 8.9
Resolving gels for Tris-Tricine SDS-PAGE
6% 8% 10 % 12 %
H2 O 2.1 1.4 0.6 0.0
Glycerin 1.4 1.4 1.4 1.4
30 % Acrylamide mix 2.1 2.8 3.5 4.2
3 M Tris-HCl (pH 8.45) 4.3 4.3 4.3 4.3
10 % SDS 0.1 0.1 0.1 0.1
10 % Ammonium persulfate (APS) 0.1 0.1 0.1 0.1
TEMED 0.008 0.006 0.004 0.004
All amounts in ml per 10 ml gel solution
10 % Stacking gels for Tris-Tricine SDS-PAGE
1 ml 2 ml 3 ml 5 ml 10 ml
H2 O 0.03 0.06 0.08 0.16 0.32
30 % Acrylamide mix 0.32 0.65 1.0 1.62 3.24
3 M Tris-HCl (pH 8.45) 0.62 1.24 1.86 3.10 6.20
10 % SDS 0.02 0.03 0.06 0.1 0.2
10 % Ammonium persulfate (APS) 0.005 0.01 0.015 0.025 0.05
TEMED 0.001 0.001 0.002 0.005 0.01
All amounts in ml
2 x Sample buffer for Tris-Tricine gels 3 x Sample buffer for native gel electrophoresis
1 ml Tris-HCl (pH 6.8) 4.5 ml Glycerine
0.8 g SDS 0.31 g Bis-Tris-Base
2.4 ml Glycerine adjust to pH 7 with HCL
0.31 g DTT Adjust volume to 10 ml using distilled H2O
2 mg Coomassie Blue G-250
Adjust volume to 10 ml using distilled H2O
VWR_v0617_E 12Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
TROUBLESHOOTING
Below are some possible solutions to potential problems. If these suggestions are unsuccessful, do not
hesitate to contact us (see 'TECHNICAL SUPPORT AND ORDERING INFORMATION').
Problem Cause Solution
Leakage of gel Glass plates and spacers have For correct alignment of glass plate sandwich it is necessary
solution not been aligned correctly to place the upper buffer chamber on top of the inverted
casting base. The bottom of the glass plates and the spacers
need to sit flat on the acrylic squares.
Glass plates or spacers are Clean thoroughly.
dirty
Uneven edges of glass plates Only use glass plates with polished edges.
Silicone gaskets of casting Clean thoroughly with a mild detergent and rinse with
base are dirty distilled water, dry without smearing, i.e. hand dry with a lint
free towel.
Silicone gaskets of casting Replace silicone gaskets which can be easily removed. New
base are brittle or worn out gaskets will stick due to their own adherence. Also, wet
silicone mats with e.g. water or buffer before placing UBC
onto the casting base to prolong their life span.
Upper buffer Gaskets of the upper buffer Remove gasket, wash in warm water to remove excess salts,
chamber is leaking chamber are deformed, too and place the gasket back in the groove. If the gaskets are
old or dirty too old or brittle, they should be replaced. If the clamps have
been over tightened in the past, the gasket can be pushed too
far into the gasket groove and will not make a seal.
Leakage of buffer through gel Do not move spacers after the gel polymerized. Make sure
sides/spacers that the glass plates are seated firmly against the gasket.
Always use combs and spacers of the same thickness.
Run time is too Buffer is too dilute After a certain running time the ions might be exhausted, so
long the electric resistance increases and the current decreases at
constant voltage, so that the maximum voltage is not enough
to keep the current constant. Check buffer recipe and try
again with new buffer. Check if voltage and current of the
different runs is the same.
Upper buffer chamber is See above 'Upper buffer chamber is leaking'.
leaking
Running at too low current or Make sure you are running using the suggested running con-
voltage ditions for this unit (see 'Technical properties'). When running
at constant current, the current value is per gel.
Running too fast Buffers are too concentrated Check buffer recipe; remake and try again. If voltage is lower
than usual when running at constant current, the buffer is
probably too concentrated.
Voltage or current set too Turn down electrical settings.
high.
VWR_v0617_E 13Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
Problem Cause Solution
Smiling of dye Center of gel is running hotter Use the cooling option of the unit. Turn down the electrical
front than the ends settings.
Bands spreading Diffusion of sample when Make sure that the samples are loaded quickly and the
outwards loading power is applied as soon as possible after loading.
Diffusion of sample during run Increase percentage of stacking gel or increase current by
in the stacking gel 25 % when stacking.
Lower ionic strength of sample Match the ionic strength of sample with that of the gel.
Bands are narrow- Ionic strength of sample is De-salt the sample or use sample buffer of the same ionic
er than sample higher than of the gel strength as the gel.
wells
Broad lanes at Will occur when adjoining Use the same sample buffer for all of the samples loaded per
bottom of gel lanes are loaded with samples gel.
with different buffers. Normal
in gradient gels.
Skewed bands Gel has not polymerized De-gas gel solution before casting and increase APS and
properly at wells. TEMED concentrations. The comb can be wiped with TEMED
just prior to casting to improve polymerization.
Salt concentration is too high Desalt the samples by dialysis, desalting columns or precipi-
in sample. tation/resolving.
Resolving gel is uneven at Overlay gel carefully using water saturated n-butanol and
top. make sure casting stand is level.
The upper buffer chamber is Check gel to make sure that it is a solid slab inside the glass
leaking either through the gel and check the setup of the apparatus to ensure a seal with
or along the side spacers. the gasket. Always use combs and spacers of the same
thickness.
Streaked bands Overloading of sample. Use less protein or sample when next loading.
Sample has precipitated. Centrifuge sample before adding sample buffer or use a
lower percentage acrylamide gel.
'Frowning' of Leakage of buffer along sides Do not move spacer after polymerization of gel. Make sure
outside lanes or along spacers inside the that the glass plates are pressed firmly against the gasket of
gel assembly. the UBC.
Silicone mats Sticky surface of the mats Wet the silicone mats with e.g. water or buffer before
wear out quickly adheres too strongly to the placing UBC onto the casting base to prolong their life
glass plates. Upon removal span.
of UBC silicone mats are torn
apart.
Double bands Due to re-oxidation or If using a reducing agent, prepare fresh sample buffer every
('doublets') insufficient reduction of the 30 days. Increase the concentration of 2-mercaptoethanol
sample. or dithiothreitol in the sample.
VWR_v0617_E 14Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
TECHNICAL SUPPORT AND ORDERING INFORMATION
For technical questions and more detailed information on VWR’s products please visit www.de.vwr.com
to find the respective contact person.
Power Supplies
Do not hesitate to contact us for advice on which Power Supply is most suitable for your application.
PerfectBlue™ Double Gel System Twin S
Item Description Cat. No.
Double gel system Twin S system for gels 10 x 10 cm (W x L), without casting base PEQL45-1010-I
system for gels 10 x 10 cm (W x L), with casting base PEQL45-1010-C
Casting base S including silicone gaskets and cams PEQL45-1010-CB
Cast-It™ S gel caster complete system for sealing up to 2 gels PEQL45-1010-CU
Silicone gaskets 2 replacement silicone gaskets for Casting base S PEQL45-1010-CG
Replacement gaskets 2 replacement gaskets for upper buffer chamber S PEQL45-1010-GK
Side clamps 2 side clamps for fixation of glass plates PEQL45-1010-CL
Wing screws 2 wing screws for fixation of side clamps PEQL45-1010-WK
Notched glass plate clear, 10 x 10 x 0.24 cm PEQL45-1010-10R
Blank glass plate clear, 10 x 10 x 0.24 cm PEQL45-1010-10G
Notched alumina plate white, 10 x 10 x 0.10 cm PEQL45-1010-10RA
Standard combs 1.5 mm 6 teeth 230 µl* PEQL45-1010-6D
1.5 mm 8 teeth 160 µl* PEQL45-1010-8D
1.5 mm 10 teeth 120 µl* PEQL45-1010-10D
1.5 mm 12 teeth 90 µl* PEQL45-1010-12D
0.8 mm 6 teeth 120 µl* PEQL45-1010-6C
0.8 mm 8 teeth 85 µl* PEQL45-1010-8C
0.8 mm 10 teeth 60 µl* PEQL45-1010-10C
0.8 mm 12 teeth 45 µl* PEQL45-1010-12C
Preparative combs 1.5 mm 2 teeth 1500/100 µl* PEQL45-1010-PD
0.8 mm 2 teeth 800/60 µl* PEQL45-1010-PC
SpacerPlacer Facilitates the correct alignment of Spacers PEQL45-1010-SP
Spacer Sets 1.5 mm 0.7 cm wide 3 pieces PEQL45-1010-SD
(2 side & 1 bottom spacer) 0.8 mm 0.7 cm wide 3 pieces PEQL45-1010-SC
* volumes are calculated for a well length of 14 mm
VWR_v0617_E 15Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
PerfectBlue™ Double Gel System Twin M
Item Description Cat. No.
Double gel system Twin M system for gels 16 x 14 cm (W x L), without casting base PEQL45-1614-I
system for gels 16 x 14 cm (W x L), with casting base PEQL45-1614-C
Casting base M including silicone gaskets and cams PEQL45-1614-CB
Cast-It™ M gel caster complete system for sealing up to 2 gels PEQL45-1614-CU
Silicone gaskets 2 replacement silicone gaskets for Casting base M PEQL45-1614-CG
Replacement gaskets 2 replacement gaskets for upper buffer chamber M PEQL45-1614-GK
Side clamps 2 side clamps for fixation of glass plates PEQL45-1614-CL
Wing screws 2 wing screws for fixation of side clamps PEQL45-1010-WK
Notched glass plate clear, 16 x 14 x 0.32 cm PEQL45-1614-14R
Blank glass plate clear, 16 x 14 x 0.32 cm PEQL45-1614-14G
Standard combs 1.5 mm 10 teeth 310 µl* PEQL45-1614-10D
1.5 mm 15 teeth 180 µl* PEQL45-1614-15D
1.5 mm 20 teeth 115 µl* PEQL45-1614-20D
1.5 mm 24 teeth 85 µl* PEQL45-1614-24D
0.8 mm 10 teeth 165 µl* PEQL45-1614-10C
0.8 mm 15 teeth 95 µl* PEQL45-1614-15C
0.8 mm 20 teeth 60 µl* PEQL45-1614-20C
0.8 mm 24 teeth 45 µl* PEQL45-1614-24C
Preparative combs 1.5 mm 2 teeth 3900/155 µl* PEQL45-1614-PD
0.8 mm 2 teeth 2095/80 µl* PEQL45-1614-PC
SpacerPlacer Facilitates the correct alignment of Spacers PEQL45-1010-SP
Spacer Sets 1.5 mm 1.0 cm wide 3 pieces PEQL45-1614-SD
(2 side & 1 bottom spacer) 0.8 mm 1.0 cm wide 3 pieces PEQL45-1614-SC
* volumes are calculated for a well length of 20 mm
PerfectBlue™ Double Gel System Twin L
Item Description Cat. No.
Double gel system Twin L system for gels 20 x 20 cm (W x L), without casting base PEQL45-2020-I
system for gels 20 x 20 cm (W x L), with casting base PEQL45-2020-C
Casting base L including silicone gaskets and cams PEQL45-2020-CB
Cast-It™ L gel caster complete system for sealing up to 2 gels PEQL45-2020-CU
Silicone gaskets 2 replacement silicone gaskets for Casting base L PEQL45-2020-CG
Replacement gaskets 2 replacement gaskets for upper buffer chamber L PEQL45-2020-GK
Side clamps 2 side clamps for fixation of glass plates PEQL45-2020-CL
Wing screws 2 wing screws for fixation of side clamps PEQL45-1010-WK
Notched glass plate clear, 20 x 20 x 0.32 cm PEQL45-2020-20R
Blank glass plate clear, 20 x 20 x 0.32 cm PEQL45-2020-20G
Standard combs 1.5 mm 10 teeth 405 µl* PEQL45-2020-10D
1.5 mm 15 teeth 245 µl* PEQL45-2020-15D
1.5 mm 20 teeth 165 µl* PEQL45-2020-20D
1.5 mm 25 teeth 115 µl* PEQL45-2020-25D
0.8 mm 10 teeth 215 µl* PEQL45-2020-10C
0.8 mm 15 teeth 130 µl* PEQL45-2020-15C
0.8 mm 20 teeth 85 µl* PEQL45-2020-20C
0.8 mm 25 teeth 60 µl* PEQL45-2020-25C
Preparative combs 1.5 mm 2 teeth 4915/155 µl* PEQL45-2020-PD
0.8 mm 2 teeth 2620/80 µl* PEQL45-2020-PC
SpacerPlacer Facilitates the correct alignment of Spacers PEQL45-1010-SP
Spacer Sets 1.5 mm 1.0 cm wide 3 pieces PEQL45-2020-SD
(2 side & 1 bottom spacer) 0.8 mm 1.0 cm wide 3 pieces PEQL45-2020-SC
* volumes are calculated for a well length of 20 mm
VWR_v0617_E 16Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems
PerfectBlue™ Double Gel System Twin ExW S
Item Description Cat. No.
Double gel system system for gels 20 x 10 cm (W x L), without casting base PEQL45-2010-I
Twin ExW S system for gels 20 x 10 cm (W x L), with casting base PEQL45-2010-C
Casting base ExW including silicone gaskets and cams PEQL45-2010-CB
Cast-It™ ExW S gel caster complete system for sealing up to 2 gels PEQL45-2010-CU
Silicone gaskets 2 replacement silicone gaskets for Casting base ExW S PEQL45-2010-CG
Replacement gaskets 2 replacement gaskets for upper buffer chamber ExW S PEQL45-2010-GK
Side clamps 2 side clamps for fixation of glass plates PEQL45-2010-CL
Wing screws 2 wing screws for fixation of side clamps PEQL45-1010-WK
Notched glass plate clear, 20 x 10 x 0.30 cm PEQL45-2010-10R
Blank glass plate clear, 20 x 10 x 0.30 cm PEQL45-2010-10G
Standard combs 1.5 mm 10 teeth 285 µl* PEQL45-2010-10D
1.5 mm 15 teeth 170 µl* PEQL45-2010-15D
1.5 mm 20 teeth 115 µl* PEQL45-2010-20D
1.5 mm 25 teeth 80 µl* PEQL45-2010-25D
0.8 mm 10 teeth 150 µl* PEQL45-2010-10C
0.8 mm 15 teeth 90 µl* PEQL45-2010-15C
0.8 mm 20 teeth 60 µl* PEQL45-2010-20C
0.8 mm 25 teeth 40 µl* PEQL45-2010-25C
Micro titer combs 1.5 mm 18 teeth 135 µl* PEQL45-2010-MTD
1.5 mm 36 teeth 55 µl* PEQL45-2010-MTC
0.8 mm 18 teeth 70 µl* PEQL45-2010-MT2D
0.8 mm 36 teeth 30 µl* PEQL45-2010-MT2C
Preparative combs 1.5 mm 2 teeth 3575/110 µl* PEQL45-2010-PD
0.8 mm 2 teeth 1905/60 µl* PEQL45-2010-PC
SpacerPlacer Facilitates the correct alignment of Spacers PEQL45-1010-SP
Spacer Sets 1.5 mm 1.2 cm wide 3 pieces PEQL45-2010-SD
(2 side & 1 bottom spacer) 0.8 mm 1.2 cm wide 3 pieces PEQL45-2010-SC
* volumes are calculated for a well length of 14 mm
VWR_v0617_E 17Instruction Manual PerfectBlue™ Vertical Double Gel Systems NOTES VWR_v0617_E 18
Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
INHALT
KURZANLEITUNG 20
GARANTIE 22
SICHERHEITSHINWEISE 22
LIEFERUMFANG 23
SYSTEMÜBERBLICK 24
Technische Merkmale 24
ALLGEMEINE BEDIENUNGSHINWEISE 26
Auslaufsicheres Abdichten der Glasplatten 26
Zusammenbau des Systems und Elektrophorese 28
Reinigung und Pflege 29
BENÖTIGTE MATERIALIEN & REZEPTE 30
Benötigte Gelvolumina 30
Benötigte Puffer-Volumina 30
Tris-Glycin SDS-PAGE 30
Tris-Tricin SDS-PAGE 31
TROUBLESHOOTING 32
TECHNISCHER SERVICE UND BESTELLINFORMATIONEN 34
Power Supplies 34
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin S 34
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin M 35
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin L 35
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin ExW S 36
VWR_v0617_D 19Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
KURZANLEITUNG
Systemübersicht
1. Mittelteil (obere Pufferkammer) mit
Seitenklemmen und Elektroden
2. Sicherheitsdeckel mit Stromkabeln 1
3. Untere Pufferkammer
4. Gießbasis 2
3
4
Auslaufsicheres Abdichten der Glasplatten
Invertieren Sie die Gießbasis, so dass die Gummimatten
nach unten und die Acrylglasquader nach oben gerichtet
sind.
Platzieren Sie das Mittelteil auf der invertierten Gießbasis.
Bauen Sie das Glasplattensandwich zusammen und schie-
ben Sie es zwischen die Seitenklemmen des Mittelteils.
Wichtig ist, dass Glasplatten und Spacer komplett auf den
Acrylglasquadern der invertierten Gießbasis aufsitzen.
Drehen Sie nun die Seitenklemmen fest. Spannen Sie auf
ähnliche Weise die Blindplatte auf der anderen Seite des
Mittelsteils ein, falls Sie nur ein Gel gießen wollen.
Drehen Sie die Gießbasis um und ziehen
Sie die Nockenhebel mit dem Griff nach
oben nach außen. Befeuchten Sie die
Dichtungen mit Wasser oder Puffer, um
deren Lebenszeit zu erhöhen. Setzen Sie
das Mittelteil samt Glasplatten mittig auf die
Dichtungen.
Schieben Sie die Nockenhebel nach innen
und drehen Sie sie gleichzeitig um eine
halbe Drehung nach unten.
VWR_v0617_D 20Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme Zusammenbau des Systems und Elektrophorese Das Gel kann nun gegossen werden. Gießen Sie langsam, um Blasenbildung zu vermeiden. Nach der Polymerisation wird das Mittelteil aus der Gießba- sis entnommen und in die untere Pufferkammer eingesetzt. Befüllen Sie das obere Pufferreservoir mit Laufpuffer, bela- den Sie das Gel mit den vorbereiteten Proben und füllen Sie danach Laufpuffer in die untere Pufferkammer. Nach Aufsetzen des Sicherheitsdeckels kann der Gellauf gestartet werden. Schalten Sie nach dem Lauf den Power Supply ab und nehmen Sie den Sicherheits- deckel herunter. Heben Sie das Mittelteil aus der unte- ren Pufferkammer und lösen Sie die Seitenklemmen. Das Gel kann nun von den Glasplatten gelöst und analysiert werden. VWR_v0617_D 21
Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme GARANTIE VWR garantiert, dass das ausgelieferte System genauestens geprüft wurde und den geltenden Anforde- rungen entspricht. Bitte überprüfen Sie die Lieferung dennoch umgehend nach Erhalt auf Vollständigkeit und eventuelle Transportschäden. Sollte die Lieferung beschädigt oder fehlerhaft sein, wenden Sie sich bitte umgehend an den Technischen Service von VWR oder Ihren VWR-Außendienstmitarbeiter (siehe 'TECHNISCHER SERVICE & BESTELLINFORMATIONEN'). Durch die Aufbewahrung des Verpackungsmaterials bis zur vollständigen Prüfung der Lieferung wird die Umwelt geschont und eine evtl. Rückholung beschleunigt. Alle Rücksendungen, Austauschlieferungen und Gutschriften müssen zuvor von VWR freigegeben werden. Auf sämtliche PerfectBlue™ Elektrophorese- und Blottingsysteme gewährt VWR 36 Monate Garantie, sofern die Systeme ausschließlich der Bedienungsanleitung entsprechend verwendet wurden und keine anderslautende Vereinbarung besteht. Ansprüche auf Ersatz oder Reparatur, die aus einer fehlerhaften Verwendung entstanden sind, werden nicht erfüllt. Die VWR GmbH verpflichtet sich zur Reparatur oder dem Ersatz des Gerätes bzw. der Rückerstattung des Kaufpreises nach ihren Bedingungen. VWR haftet nicht für Folgeschäden, die aus der Verwendung des Systems entstanden sind. Nach Ablauf der Garan- tiezeit können defekte PerfectBlue™ Elektrophorese- oder Blotting-Systeme durch VWR kostengünstig repariert werden. Um Neuentwicklungen zeitnah einführen zu können, behält es sich VWR vor, technische Details ohne Vorankündigung zu ändern. SICHERHEITSHINWEISE Bitte lesen Sie diese Bedienungsanleitung sorgfältig durch, bevor Sie das System in Betrieb nehmen. Verwenden Sie zur Stromversorgung eine CE-konforme Gleichstrom-Spannungsquelle. Trennen Sie das System von der Stromversorgung, bevor Sie den Sicherheitsdeckel entfernen oder das System bewegen. Trennen Sie das System bei Nichtbenutzung stets von der Stromversorgung. Die für das System definierte maximale Stromstärke und Spannung, welche auf dem Typenschild der Pufferkammer angegeben ist, darf nicht überschritten werden. Um die Entstehung eines Überdruckes zu vermeiden, darf die Fließrate des Kühlwassers durch das integrierte Kühlsystem 12 l/min nicht überschreiten. Bei Anschluss an einen Wasserhahn muss mit schwankendem Wasserdruck gerechnet werden, weshalb hier eine Fließrate von lediglich 2 l/min gewählt werden sollte. VWR_v0617_D 22
Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
LIEFERUMFANG
Sofern nicht anders vereinbart bzw. auf dem Lieferschein angegeben, enthält der Lieferumfang der
Modelle Twin S, Twin M, Twin L und Twin ExW S folgende Komponenten:
Twin S (PEQL45-1010-I) Twin M (PEQL45-1614-I)
Mittelteil mit Platin-Elektroden Mittelteil mit Platin-Elektroden
Untere Pufferkammer Untere Pufferkammer
Sicherheitsdeckel mit Stromkabeln Sicherheitsdeckel mit Stromkabeln
4 normale Glasplatten 4 normale Glasplatten
2 ausgeschnittene Glasplatten 4 ausgeschnittene Glasplatten
2 ausgeschnittene Aluminium-Ceramplatten 4 Seitenklemmen
4 Seitenklemmen 2 Kämme, 1.5 mm dick, 10 Zähne
2 Kämme, 0.8 mm dick, 10 Zähne 2 Kämme 1.5 mm dick, 15 Zähne
4 Seitenspacer, 0.8 mm dick 8 Seitenspacer, 1.5 mm dick
2 Bodenspacer, 0.8 mm dick 4 Bodenspacer, 1.5 mm dick
2 Ersatzgummidichtungen 2 Ersatzgummidichtungen
4 Ersatzfedern 4 Ersatzfedern
1 Blindplatte für Einzelgelläufe 1 Blindplatte für Einzelgelläufe
1 'SpacerPlacer' zum Ausrichten der Spacer 1 'SpacerPlacer' zum Ausrichten der Spacer
Twin S (PEQL45-1010-C) Twin M (PEQL45-1614-C)
wie PEQL45-1010-I aber inklusive Gießbasis wie PEQL45-1614-I aber inklusive Gießbasis
Twin ExW S (PEQL45-2010-I) Twin L (PEQL45-2020-I)
Mittelteil mit Platin-Elektroden Mittelteil mit Platin-Elektroden
Untere Pufferkammer Untere Pufferkammer
Sicherheitsdeckel mit Stromkabeln Sicherheitsdeckel mit Stromkabeln
4 Glasplatten 4 Glasplatten
4 ausgeschnittene Glasplatten 4 ausgeschnittene Glasplatten
4 Seitenklemmen 4 Seitenklemmen
2 Kämme, 0.8 mm dick, 15 Zähne 2 Kämme, 1.5 mm dick, 15 Zähne
2 Kämme, 0.8 mm dick, 20 Zähne 2 Kämme, 1.5 mm dick, 20 Zähne
8 Seitenspacer, 0.8 mm dick 8 Seitenspacer, 1.5mm dick
4 Bodenspacer, 0.8 mm dick 4 Bodenspacer, 1.5mm dick
2 Ersatzgummidichtungen 2 Ersatzgummidichtungen
4 Ersatzfedern 4 Ersatzfedern
1 Blindplatte für Einzelgelläufe 1 Blindplatte für Einzelgelläufe
1 'SpacerPlacer' zum Ausrichten der Spacer 1 'SpacerPlacer' zum Ausrichten der Spacer
Twin ExW S (PEQL45-2010-C) Twin L (PEQL45-2020-C)
wie PEQL45-2010-I aber inklusive Gießbasis wie PEQL45-2020-I aber inklusive Gießbasis
VWR_v0617_D 23Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
SYSTEMÜBERBLICK
Die vertikalen PerfectBlue™ Doppelgelsysteme Twin S, M, L und ExW S überzeugen mit einer durch-
dachten Konstruktion und hochwertiger Verarbeitung. Durch die besondere Anordnung von 3 Kathoden
und einer langen, die komplette Basis der Elektrophoresekammer umlaufende Anode, werden mit ihnen
außerordentlich gute elektrophoretische Separationen erzielt. Sämtliche Kammern sind mit einem Was-
serzirkulationssystem ausgestattet, welches aufgrund der Verwendung von sehr gut Wärme leitendem
Aluminium-Ceram ein effektives Kühlen erlaubt. Dadurch können hohe Migrationsgeschwindigkeiten
erzielt werden, ohne das exzellente Laufverhalten negativ zu beeinflussen. Das zur Verfügung stehende
Gießsystem erlaubt das einfache und auslaufsichere Gießen von bis zu 2 Gelen gleichzeitig. Es ist so
konzipiert, dass die Elektrophorese nach der Polymerisation der Gele ohne einen aufwendigen Aus- und
Wiedereinbau der Gelplatten gestartet werden kann. Somit verkürzt sich die Arbeitszeit und minimieren
sich mögliche Fehlerquellen. Die vier Formate, in denen die vertikalen PerfectBlue™ Doppelgelsysteme
zur Verfügung stehen und das umfangreiche Zubehör schaffen beste Voraussetzungen für vielfältigste
Einsatzmöglichkeiten. Sämtliche PerfectBlue™ Gelkammern von VWR werden unter Verwendung einer
speziellen Klebetechnik aus einzelnen Acrylglas-Frästeilen zusammengesetzt. Dadurch werden mechani-
sche Spannungen durch z.B. Wärmeausdehnung und Handhabung ausgeglichen und führen nicht zur
Schädigung der Kammer. Unser auf langjährige Erfahrung gestütztes Vertrauen in die Haltbarkeit
unserer Gelsysteme veranlasst uns zur Vergabe einer 3-jährigen Garantie.
Mittelteil (obere Pufferkammer)
mit Seitenklemmen & Elektro- Sicherheitsdeckel mit
den Stromkabeln
Untere Pufferkammer Gießbasis
Technische Merkmale
PerfectBlue™ Bestell-Nr. Gelgröße benötigtes maximale Stromstärke typische
(B x L) Puffervolumen Spannung pro Gel Laufzeit
10 x 10
Twin S PEQL45-1010-I/-C 250 ml bis 500 V 15 - 35 mA 30 - 90 min
cm
16 x 14
Twin M PEQL45-1614-I/-C 650 ml bis 500 V 15 - 50 mA 60 - 120 min
cm
20 x 20
Twin L PEQL45-2020-I/-C 1250 ml bis 500 V 15 - 75 mA 60 - 180 min
cm
VWR_v0617_D 24Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
20 x 10
Twin ExW S PEQL45-2010-I/-C 650 ml bis 500 V 30 - 45 mA 30 - 90 min
cm
VWR_v0617_D 25Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme ALLGEMEINE BEDIENUNGSHINWEISE Auslaufsicheres Abdichten der Glasplatten Für das Gießen von Gelen empfehlen wir die Verwendung des Mittelteils der Gelkammer zum Einspan- nen der Glasplatten und die systemeigene Gießbasis zum Abdichten der Glasplatten. Letztere ist im Lieferumfang inbegriffen oder kann nachträglich erworben werden. Darüber hinaus können mit den optional erhältlichen Cast-It™ Gelgießständen Gele gegossen werden, während in der Gelkammer eine Elektrophorese stattfindet (siehe 'TECHNISCHER SERVICE & BESTELLINFORMATIONEN'). 1. Das Mittelteil ist über ein nützliches Stift/Nut-Prinzip verrutschsicher mit der unteren Pufferkammer verbunden. Es wird aus der unteren Pufferkammer entnommen, indem es kurz angehoben und seitlich nach oben aus der beidseitigen Nut der unteren Pufferkammer herausgeführt wird. Lösen Sie die schwarzen Flügelschrauben der Seitenklemmen und schieben Sie die Seitenklemmen jeweils in die äußerste Position. Die Seitenklemmen sind so konzipiert, dass sie aufgrund der spe- ziellen Federn in dieser Position bleiben. 2. Drehen Sie die Gießbasis um, so dass die Gummidichtungen nach unten gerichtet sind. Dies ermöglicht die nun folgende, exakte Positionierung der Glasplatten im Mittelteil, welche für das auslaufsichere Abdichten der Glasplatten essentiell ist. 3. Setzen Sie das Mittelteil auf die invertierte Gießbasis. Bauen Sie das Glasplattensandwich (normale & ausgeschnittene Glasplat- te, 2 Seitenspacer) zusammen und schieben Sie es von oben zwischen die Seitenklemmen des Mittelteils. Die ausgeschnittene Glasplatte muss hierbei nach innen gerichtet sein, damit das Gel später Kontakt zum Laufpuffer hat. Achten Sie darauf, dass sowohl die Glasplatten als auch die Spacer vollständig und eben auf den Acryl-Blöcken der invertierten Gießbasis aufsit- zen. Die Verwendung des SpacerPlacers erleichtert das Ausrich- ten der Spacer. Schieben Sie nun die Seitenklemmen nach innen und schrauben Sie die Seitenklemmen fest, bis die Glasplatten die Gummidichtungen des Mittelteils leicht flachdrücken. Vor- sicht: ein zu festes Anziehen der Seitenklemmen kann zum Bre- chen der Glasplatten führen! Setzen Sie nun auf der anderen Seite ebenfalls Glasplatten mit Seiten-Spacern oder eine Blindplatte ein, je nachdem ob Sie ein oder zwei Gele gießen möchten. Mit der Blindplatte oder dem zweiten Glasplattensandwich wird aus dem Mittelteil das später benötigte obere Pufferreservoir. VWR_v0617_D 26
Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
4. Nachdem die Glasplatten justiert und fixiert wur-
den, wird das Mittelteil nach oben abgenommen.
Die Gießbasis wird nun herumgedreht, so dass die
Silikongummidichtungen nach oben zeigen. Be-
feuchten Sie die Dichtungen mit Wasser oder Puf-
fer, um deren Lebenszeit zu erhöhen.
5. Platzieren Sie das Mittelteil auf den
Gummidichtungen der Gießbasis. Die
Nockenhebel müssen dazu mit dem
Griff nach oben zeigend ganz nach
außen gezogen werden. Anschließend
werden die Nockenhebel nach innen, in
die Aussparungen des Mittelteils ge-
schoben und synchron um eine halbe
Umdrehung gedreht. Die Exzenterwir-
kung der Nockenhebel drückt das Mit-
telteil und somit die untere Kante der
Glasplatten nach unten auf die Silikon-
gummimatten der Gießbasis.
6. Sobald die Glasplatten in der Gießbasis fest fixiert
sind, kann das Gel gegossen werden. Gießen Sie die
Gel-Lösung langsam zwischen die Glasplatten, um
Luftblasenbildung zu vermeiden. Sobald das Gel ge-
gossen ist, wird ein Kamm von oben zwischen die
Glasplatten gesteckt, damit sich die Taschen bilden
können.
Beim Einsatz von Fertiggelen kann auf die Verwendung
der Gießbasis verzichtet werden. Da einige Fertiggele
extrem dünne Glas- oder Plastikplatten besitzen, sollte
hier in besonderem Maße ein zu festes Anziehen der
Seitenklemmen vermieden werden, um eine Beschädi-
gung des Fertiggels zu vermeiden.
VWR_v0617_D 27Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme Zusammenbau des Systems und Elektrophorese 1. Setzen Sie das Mittelteil mit den eingespannten und polyme- risierten Gelen in die untere Pufferkammer ein. Dabei wird der Stift, der sich jeweils unten an den beiden kurzen Seiten des Mittelteils befindet, in die entsprechende Nut der unteren Pufferkammer eingeführt und das Mittelteil anschließend zentral abgesetzt. Dieses Stift/Nut-System garantiert den fes- ten Sitz des Mittelteils in der unteren Pufferkammer und ge- währleistet die Reproduzierbarkeit der elektrophoretischen Bedingungen. 2. Zur Kühlung können nun die beiden Anschlüsse des im Mittelteil integrierten Kühlsystems über flexible Wasser- schläuche und Schlauchklemmen mit dem Wasserhahn oder einer Kühlthermostat-Pumpe verbunden werden. Die Anschlüsse des integrierten Kühlsystems haben einen In- nendurchmesser von 6 mm und einen Außendurchmesser von 9 mm. Achten Sie beim Anschluss auf die Markierun- gen 'in' und 'out' an den Anschlüssen des Mittelteils, um die richtige Durchflussrichtung sicherzustellen. Um die Ent- stehung eines Überdruckes zu vermeiden, darf die Fließrate des Kühlwassers durch das integrierte Kühlsystem 12 l/min nicht überschreiten. Bei Anschluss an einen Wasserhahn muss mit schwankendem Wasserdruck gerechnet werden, weshalb hier eine Durchflussrate von lediglich 2 l/min ge- wählt werden sollte. 3. Geben Sie solange Elektrophoresepuffer in das Pufferreser- voir des Mittelteils, bis das Gel mit ca. 5 mm Puffer bedeckt ist. Achten Sie darauf, dass der Puffer bis über die kürzere bzw. ausgeschnittene Glasplatte reicht. Es darf kein Puffer vom Mittelteil in die untere Pufferkammer auslaufen. 4. Entfernen Sie den Kamm und spülen Sie die Taschen mit Puffer. Beladen Sie das Gel mit den vorbereiteten Proben. 5. Füllen Sie Elektrophoresepuffer in die untere Pufferkammer bis 2 – 3 mm über das untere Ende des Gels. Das offene Ende des Gels muss mit Puffer in Kontakt kommen, um eine vollständige Gelelektrophorese zu gewährleisten. VWR_v0617_D 28
Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
6. Schließen Sie das System durch Aufsetzen des Sicher-
heitsdeckels. Aufgrund des asymmetrischen Designs des
Sicherheitsdeckels ist dies nur in der Orientierung mög-
lich, in der das rote Stromkabel den Kontakt zur positiven
Anode im unteren Pufferreservoir und das schwarze
Stromkabel den Kontakt zur negativen Kathode (oberes
Pufferreservoir) herstellt.
7. Starten Sie nun die Wasserzirkulation, falls eine Kühlung
erwünscht ist. Um die Entstehung eines Überdruckes zu
vermeiden, darf die Fließrate des Kühlwassers durch das
inte- grierte Kühlsystem 12 l/min nicht überschreiten. Bei
Anschluss an einen Wasserhahn muss mit schwankendem
Wasserdruck gerechnet werden, weshalb hier eine Fließ-
rate von lediglich 2 l/min gewählt werden sollte.
8. Verbinden Sie schließlich die Stromkabel mit den An-
schlüssen des Power Supplies (rot mit rot, schwarz mit
schwarz) und starten Sie die Elektrophorese indem sie ei-
ne geeignete Spannung oder Stromstärke (siehe 'Techni-
sche Merkmale') definieren.
9. Um die Elektrophorese zu beenden, schalten Sie den
Power Supply und die Wasserversorgung ab.
10. Der Sicherheitsdeckel kann abgenommen werden, indem
man leicht gegen die Acrylzapfen drückt, die vom Mittel-
teil kommend durch den Deckel ragen. Heben Sie nun das
Mittelteil aus der unteren Pufferkammer durch seitliches
Schieben und Anheben des Mittelteils. Entleeren Sie die
beiden Pufferreservoire separat.
11. Durch Lösen der Seitenklemmen können Sie den Gel-
aufbau nun auseinander nehmen. Fahren Sie mit der
Analyse des Gels fort.
Reinigung und Pflege
Mit Ausnahme des Sicherheitsdeckels sollten sämtliche Systemkomponenten nach der Benutzung unter
fließendem Wasser gereinigt werden. Salzrückstände und Polyacrylamidreste können mit einem milden
Reinigungsmittel entfernt werden. Ein anschließendes kurzes Abspülen mit destilliertem Wasser verhin-
dert die Bildung von Salzflecken. Um die Platinelektroden nicht zu beschädigen, empfehlen wir, das
Mittelteil an der Luft trocknen zu lassen und nicht mit Papiertüchern trocken zu wischen. Sämtliche Teile
dürfen nur vollständig trocken gelagert werden.
Zur Reinigung von Acrylglas dürfen weder Ethanol noch sonstige organische Lösungsmittel verwendet
werden, da sonst Risse im Material entstehen können!
VWR_v0617_D 29Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
BENÖTIGTE MATERIALIEN & REZEPTE
Benötigte Gelvolumina
Diese Volumina wurden kalkuliert für die bei VWR erhältlichen Glasplatten und Spacer.
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin S Twin M Twin ExW S Twin L
0.8 mm Spacer 8 ml 18 ml 16 ml 32 ml
1.5 mm Spacer 15 ml 34 ml 30 ml 60 ml
Benötigte Puffer-Volumina
PerfectBlue™ Doppelgelsystem Twin S Twin M Twin ExW S Twin L
250 ml 650 ml 650 ml 1250 ml
Tris-Glycin SDS-PAGE
10 x Tris-Glycin Elektrophoresepuffer
30 g/l Tris [0.25 M]
144 g/l Glycin [1.92 M]
10 g/l SDS [1%, w/v]
ad 1 l mit H2O
Trenngele für Tris-Glycin SDS-PAGE
6% 8% 10 % 12 % 15 %
H2 O 5.3 4.6 4.0 3.3 2.3
30 % Acrylamid-Mix 2.0 2.7 3.3 4.0 5.0
1.5 M Tris (pH 8.8) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
10 % SDS 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
10 % Ammoniumpersulfat (APS) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
TEMED 0.008 0.006 0.004 0.004 0.004
Alle Mengenangaben in ml für 10 ml Gellösung
5 % Sammelgele für Tris-Glycin SDS-PAGE
1 ml 2 ml 3 ml 5 ml 10 ml
H2 O 0.68 1.4 2.1 3.4 6.8
30 % Acrylamid-Mix 0.17 0.33 0.5 0.83 1.7
1.0 M Tris (pH 6.8) 0.13 0.25 0.38 0.63 1.25
10 % SDS 0.01 0.02 0.03 0.05 0.1
10 % Ammoniumpersulfat (APS) 0.01 0.02 0.03 0.05 0.1
TEMED 0.001 0.002 0.003 0.005 0.01
Alle Mengenangaben in ml
VWR_v0617_D 30Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
3 x Probenpuffer für die Tris-Glycin SDS-PAGE
1.75 ml 1 M Tris-HCl pH 6.8
1.5 ml Glycerin
5 ml SDS (10 %)
0.5 ml -Mercaptoethanol
1.25 ml Bromphenol-Blau
Tris-Tricin SDS-PAGE
1 x Tris-Tricin Elektrophoresepuffer
Kathodenpuffer 12.11 g/l Tris [0.1 M]
17.92/l g Tricin [0.1 M]
1 g/l SDS [0.1%, w/v]
ad 1 l mit H2O
Anodenpuffer 0.2 M Tris-HCl, pH 8.9
Trenngele für Tris-Tricin SDS-PAGE
6% 8% 10 % 12 %
H2 O 2.1 1.4 0.6 0.0
Glycerin 1.4 1.4 1.4 1.4
30 % Acrylamid-Mix 2.1 2.8 3.5 4.2
3 M Tris-HCl (pH 8.45) 4.3 4.3 4.3 4.3
10 % SDS 0.1 0.1 0.1 0.1
10 % Ammoniumpersulfat (APS) 0.1 0.1 0.1 0.1
TEMED 0.008 0.006 0.004 0.004
Alle Mengenangaben in ml für 10 ml Gellösung
10 % Sammelgele für Tris-Tricine SDS-PAGE
1 ml 2 ml 3 ml 5 ml 10 ml
H2 O 0.03 0.06 0.08 0.16 0.32
30 % Acrylamid-Mix 0.32 0.65 1.0 1.62 3.24
3 M Tris (pH 8.45) 0.62 1.24 1.86 3.10 6.20
10 % SDS 0.02 0.03 0.06 0.1 0.2
10 % Ammoniumpersulfat (APS) 0.005 0.01 0.015 0.025 0.05
TEMED 0.001 0.001 0.002 0.005 0.01
Alle Mengenangaben in ml
2 x Probenpuffer für Tris-Tricin-Gele 3 x Probenpuffer für Native Gelelektrophorese
1 ml Tris-HCl pH 6.8 4.5 ml Glycerin
0.8 g SDS 0.31 g Bis-Tris
2.4 ml Glycerin pH-Wert einstellen mit HCl auf pH 7
0.31 g DTT ad 10 ml mit H2O
2 mg Coomassie Blue G-250
ad 10 ml mit H2O
VWR_v0617_D 31Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
TROUBLESHOOTING
Hier finden Sie passende Lösungen zu möglichen Problemen. Sollten Sie weitere Fragen haben, wird
Ihnen das VWR-Service-Team gerne weiterhelfen (TECHNISCHER SERVICE & BESTELLINFORMATI-
ONEN).
Problem Ursache Lösung
Gellösung läuft aus Glasplatten und Spacer Beim Einspannen des Glasplattensandwiches muss das
wurden nicht korrekt justiert Mittelteil unbedingt auf die invertierte Gießbasis gestellt
werden. Glasplatten und Spacer müssen vollständig auf den
Acrylglasquadern der invertierten Gießbasis aufsitzen.
Glasplatten und Spacer sind Reinigen Sie Glasplatten und Spacer vor der Verwendung
verschmutzt gründlich.
Die Ränder der Glasplatten Achten Sie darauf, dass insbesondere die untere Glasplatten-
sind uneben kante gerade und abgeschliffen ist, damit sie optimal durch
die Silikongummimatte der Gießbasis abgedichtet wird.
Silikongummimatten der Die Silikongummimatten sollten gründlich mit einem milden
Gießbasis sind verschmutzt Reinigungsmittel gereinigt, mit destilliertem Wasser abgespült
und fusselfrei getrocknet werden; z. B. an der Luft mit fussel-
freiem Papier oder Fensterleder.
Silikonmatten der Gießbasis Erneuern Sie die Silikonmatten, welche lediglich aufgrund
sind spröde ihrer eigenen Klebkraft auf der Gießbasis sitzen und somit
ohne Aufwand ab- und aufgesetzt werden können. Bitte
beachten Sie, dass das Anfeuchten der Dichtungen mit
Wasser oder Puffer vor dem Aufsetzen des Mittelteils deren
Lebenszeit deutlich erhöht.
Puffer läuft aus Gummidichtungen des Mittel- Waschen Sie die Gummidichtungen nach jeder Verwendung
oberem Pufferre- teils sind zu alt oder flachge- mit fließendem Wasser ab, um Salzreste zu entfernen. Ist die
servoir aus drückt, um gut abdichten zu Gummidichtung zu alt oder spröde, sollte sie ersetzt werden.
können Wurden die Seitenklemmen vorher zu fest angezogen, kann
das Herausnehmen der Gummidichtung und erneutes Einset-
zen in die Aussparung helfen.
Auslaufen des Puffers an den Die Spacer sollten nach der Polymerisation nicht mehr
Seiten oder durch die Spacer bewegt werden. Die Glasplatten müssen fest an die Gummi-
innerhalb des Gelaufbaus dichtungen des Mittelteils gedrückt sein. Verwenden Sie
immer Kämme und Spacer gleicher Dicke.
Laufzeit dauert zu Puffer ist zu schwach Evtl. sind ab einer gewissen Laufzeit die Ionen erschöpft, so
lange dass der elektrische Widerstand steigt und die Stromstärke
bei konst. Spannung sinkt, bzw. die max. Spannung nicht
ausreicht, um die Stromstärke konstant zu halten. Überprüfen
Sie das Pufferrezept. Setzen Sie frischen Puffer an. Prüfen Sie
die eingestellten und tatsächlichen elektrischen Parameter.
Puffer läuft aus oberer Puffer- Siehe oben: Problem 'Puffer läuft aus oberem Pufferreservoir
kammer aus'.
Spannung oder Stromstärke Überprüfen Sie die Einstellungen des Power Supply. Die unter
ist zu niedrig 'Technische Merkmale' angegebene konstante Stromstärke
bezieht sich auf jeweils ein Gel!
VWR_v0617_D 32Bedienungsanleitung PerfectBlueTM Vertikale Doppelgelsysteme
Problem Ursache Lösung
Gel läuft zu schnell Puffer ist zu hoch konzentriert Überprüfen Sie das Pufferrezept. Setzen sie frischen Puffer
an. Ist die Voltzahl niedriger als üblich bei gleicher Strom-
stärke, ist der Puffer wahrscheinlich zu hoch konzentriert.
Spannung oder Stromstärke Reduzieren Sie die entsprechenden Parameter.
sind zu hoch
'Smiling-Effekt' der Die Mitte des Gels erwärmt Nutzen Sie die Kühloption des Gerätes.
Lauffront sich schneller als der Rand Reduzieren Sie ggf. die Stromstärke.
Banden dehnen Diffusion der Proben beim Die Proben sollten schnell nacheinander aufgetragen und der
sich nach außen Beladen Gellauf zügig gestartet werden.
aus
Diffusion der Proben während Erhöhen Sie Konzentration des Sammelgels oder erhöhen Sie
des Laufes die Stromstärke während des Sammel-Laufes um 25%.
Niedrigere Ionenstärke der Passen Sie die Ionenstärke der Probe der des Gels an.
Probe
Banden liegen Die Ionenstärke der Probe ist Entsalzen Sie die Proben oder verwenden Sie einen Proben-
enger zusammen höher als die des Gels puffer derselben Ionenstärke wie die des Gels.
als die Taschen
Breitere Spuren am Bei Verwendung unterschiedli- Verwenden Sie für alle Proben den gleichen Probenpuffer.
Ende des Gels cher Probenpuffer. Normal bei
Gradientengelen
Verzerrte Banden Gel war an den Taschen Entgasen Sie die Gellösung vor dem Gießen und erhöhen
noch nicht vollständig Sie die APS- und TEMED-Konzentrationen. Der Kamm kann
polymerisiert vorher mit TEMED abgewischt werden, um die Polymerisa-
tion zu verbessern.
Die Salzkonzentration der Entsalzen der Probe durch Dialysieren, Entsalzungssäule
Proben ist zu hoch oder Präzipitation, Waschen und erneutes Lösen.
Keine gerade Oberkante des Überschichten Sie das Trenngel im Anschluss an das Gießen
Trenngels vorsichtig mit N-Butanol oder Wasser.
Puffer des oberen Pufferre- Das Gel muss vollständig auspolymerisieren. Das Glasplat-
servoirs läuft durch das Gel tensandwich muss fest genug in den Seitenklemmen sitzen.
oder entlang der Spacer aus Verwenden Sie immer Kämme und Spacer gleicher Stärke.
Verschmierte Überladung des Gels Setzen Sie ein geringeres Protein- oder Probenvolumen ein.
Banden/Spuren
Probe ist präzipitiert Zentrifugieren Sie die Probe vor dem Beladen des Gels ab.
Verzerrte Banden Auslaufen des Puffers an den Die Spacer sollten nach der Polymerisation nicht mehr
in den äußeren Seiten oder durch die Spacer bewegt werden. Die Glasplatten müssen fest an die Gum-
Spuren innerhalb des Gelaufbaus midichtungen des Mittelteils gedrückt sein.
Silikondichtungen Glasplatten kleben zu stark Feuchten Sie die Silikondichtungen mit Wasser oder Puffer
der Gießbasis an den Dichtungen und an, bevor Sie das Mittelteil auf die Gießbasis setzen. Dies
nutzen sich strapazieren diese beim erhöht die Lebenszeit der Dichtungen deutlich.
schnell ab Abnehmen des Mittelteils
Doppelbanden Aufgrund von Reoxidation Setzen Sie Probenpuffer mit reduzierendem Agens monat-
oder ungenügender Reduk- lich frisch an. Erhöhen Sie die Konzentration von β-Mer-
tion der Probe captoethanol oder Dithiothreitol (DTT) in der Probe.
VWR_v0617_D 33You can also read
