Quantum Blue fCAL extended
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Quantum Blue®
fCAL extended
Quantitative
Lateral Flow Assay
For In Vitro Diagnostic Use.
LF-CALE25 25 tests
Release date: 2019-12-20
Version A1
BÜHLMANN Laboratories AG
English page 3
Deutsch Seite 8
Baselstrasse 55
4124 Schönenbuch, Switzerland Français page 14
Tel.: +41 61 487 1212 Italiano pagina 20
Fax: +41 61 487 1234 Español página 26
info@buhlmannlabs.ch Português página 32Release date: 2019-12-20 2/42 Quantum Blue® fCAL extended
ENGLISH REAGENTS & MATERIAL SUPPLIED
SUPPLEMENTARY
INTENDED USE Fecal extraction devices
The BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended is an in Fecal extraction devices described below are not delivered
vitro diagnostic test for the quantitative determination of with the kit and either of them has to be ordered with the
calprotectin in human stool specimens intended as an aid kit.
in the assessment of intestinal mucosal inflammation. The Extraction device
Quantity Code
assay results can be used as an aid to diagnosis in Kits
distinguishing organic, inflammatory disease of the Packages of 50, 200 or 500 B-CALEX-C50
gastrointestinal tract (inflammatory bowel disease, IBD, CALEX® Cap tubes available, filled with
B-CALEX-C200
device 5 mL extraction buffer
specifically Crohn’s disease or ulcerative colitis, UC) from B-CALEX-C500
Ready to use
functional disease (irritable bowel syndrome, IBS) (ref. 1-7),
in patients with chronic abdominal pain and as an aid to 50 tubes consisting of
Smart-Prep B-CAL-RD
IBD disease monitoring (ref. 7-18). spatulas and base caps
For laboratory use only. 50 tubes consisting of tube,
EU: For professional use. ScheBo® Quick- cone & dosing tip, each filled
with 1.3 mL extraction buffer B-CAL-SO50
PrepTM
Ready to use
PRINCIPLE OF THE ASSAY
Table 2
The test is designed for the selective measurement of
calprotectin antigen by sandwich immunoassay. A MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
monoclonal capture antibody (mAb) highly specific for
calprotectin is coated onto the test membrane. A second • Vortex mixer for stool extraction
monoclonal detection antibody conjugated to gold colloids • Precision pipettes with disposable tips: 10-100 µL, 100-
is deposited onto the conjugate release pad and released 1000 µL and 250-2500 µL
into the reaction system after addition of the extracted and
diluted stool sample. The calprotectin / anti-calprotectin • Centrifuge
gold conjugate binds to the anti-calprotectin antibody • 5 mL polypropylene or polystyrene tubes for dilution of
coated on the test membrane (test line) and the remaining the extracts
free anti-calprotectin gold conjugate binds to the goat anti- • Timer (optional)
mouse antibody coated on the test membrane (control
• Quantum Blue® Reader available from BÜHLMANN
line). The signal intensities of the test line (T) and the
(order code: BI-POCTR-ABS)
control line (C) are measured quantitatively by the
BÜHLMANN Quantum Blue® Reader. • Soft tissues or blotting paper
REAGENTS SUPPLIED AND PREPARATION PRECAUTIONS
Reagents Quantity Code Comments Safety precautions
vacuum- • The controls of this test contain components of human
Test Cassette 25 pieces B-LFCALUS-TC sealed in a origin. Although tested and found negative for HBV
foil pouch surface antigen, HCV and HIV1/2 antibodies, the
1 bottle reagents should be handled as if capable of transmitting
Extraction Buffer B-CAL-EX Ready to use
125 mL infections and should be handled in accordance with
2 vials Good Laboratory Practices (GLP) using appropriate
Controls Low* / High* B-CALE-CONSET Ready to use
0.5 mL precautions.
RFID Chip Card 1 piece B-CALE-RCC
White plastic • Patient specimens should be handled as if capable of
card transmitting infections and should be handled in
RFID Chip Card 1 piece B-CALE-RCC720
Green plastic accordance with Good Laboratory Practice (GLP) using
card appropriate precautions.
Table 1
* The controls contain lot specific amounts of native human calprotectin.
• Reagents: Avoid contact of reagents with the skin, eyes,
Refer to the additional QC data sheet for actual concentrations. or mucous membranes. If contact does occur,
immediately wash with generous amounts of water;
STORAGE AND SHELF LIFE OF REAGENTS otherwise, irritation can occur.
• Reagents and chemicals have to be treated as
All kit components are stable at 2-8 °C until the expiration
hazardous waste according to the national biohazard
date printed on the labels.
safety guideline or regulation.
Release date: 2019-12-20 3/42 Quantum Blue® fCAL extendedTechnical precautions measurement of the extracts see step 2 under the chapter
assay procedure.
Kit components Fecal calprotectin extracts obtained by manual weighing
• All reagents and test samples must be equilibrated to method, by BÜHLMANN Smart-Prep or by ScheBo® Quick-
room temperature (18-28 °C) before starting the assay. Prep™ are stable at 2-8 °C for ≤ 7 days or at -20 °C for
• Mix well (vortex) the reagents before use. 36 months.
• Components must not be used after the expiry date
printed on the labels. ASSAY PROCEDURE
• Do not mix different lots of reagents. The assay procedure consists of three steps:
• Test cassettes cannot be re-used. 1. Extraction of stool samples
Test procedure The extraction is described in the instruction for use
delivered with the respective extraction devices.
• Read the instructions carefully prior to carrying out the
assay. Assay performance will be adversely affected, if CALEX® Cap device: Liquid stool samples can be
reagents are incorrectly diluted, handled or stored under pipetted directly into the CALEX® Cap device. Unscrew
conditions other than those as detailed in this instruction the blue cap and pipet 10 μL of stool sample into the
for use. device. Recap the CALEX® Cap device and proceed
with vortexing step according to the extraction
• The Quantum Blue® Reader must be switched on and
procedure described and illustrated in the instruction for
programmed for the Quantum Blue® fCAL extended
use delivered with the CALEX® Cap device.
assay. Load the assay method using the RFID chip card
(B-CALE-RCC or B-CALE-RCC720) before starting the 2. Sample processing
assay (see Quantum Blue® Reader manual). • Smart-Prep or ScheBo® Quick PrepTM: Let the stool
• Use the RFID chip card in order to change lot-specific extract settle for 10 minutes after extraction. Dilute the
test parameters. supernatant 1:10 with extraction buffer (e.g. 50 µL stool
extract and 450 µL extraction buffer) and mix well. Let
• Patient samples that are not properly handled may
the samples equilibrate for at least 5 minutes at 18-
cause inaccurate results.
28 °C prior to proceeding to the next step (step no. 3).
• In order to receive reliable and quantitative results it is
• CALEX® Cap device: After extraction, let the stool
important to homogenize the stool sample entirely in the
extract settle for 10 minutes with the white head of the
extraction device.
device down. Unscrew the blue cap. The supernatant
• With BÜHLMANN Smart-Prep and ScheBo® Quick- can be used without further dilution in the lateral flow
PrepTM, it is important to centrifuge the extracts before assay.
storage. Centrifuge the tubes for 5 minutes at 3000 x g.
After centrifugation the supernatant must be transferred 3. Lateral flow assay procedure and readout
into a fresh storage tube. Two alternative methods can be loaded from the respective
RFID chip card: B-CALE-RCC or B-CALE-RCC720. Select
SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE one of the RFID chip cards before starting the experiments.
Load the test method from the RFID chip card on the
For the extraction procedure, less than 1 g of native stool Quantum Blue® Reader.
specimen is required. Collect stool specimen into plain
tubes.
Important: The specimen must be collected without any
chemical or biological additives.
Specimen transport
Stool specimens should be received for processing by the
laboratory within 3 days of collection. The specimens may
be transported at room temperature or refrigerated.
Specimen storage
Stool specimens should be refrigerated at 2-8 °C and
extracted within 3 days of receipt at the laboratory. Do not
store samples at elevated temperatures.
3.1. Method with internal timer
Extract storage • Use the green RFID chip card.
Fecal calprotectin extracts obtained with CALEX® Cap • Load the test cassette onto the test cassette holder of
device are stable at room temperature for 3 days and at the reader.
2-8 °C for up to 6 days. For longer storage, freeze extracts
at -20 °C. Frozen extracts are stable for a period of up to • Add 60 µL of diluted stool extract onto the sample
23 months. loading port of the test cassette.
CALEX® Cap extracts can be stored and frozen directly • Close the test cassette holder and start the
within the CALEX® Cap device. Extracts can be subject to measurement by pressing the start button.
four freeze-thaw cycles. Prior to measurement, allow frozen • The scan starts automatically after 12 minutes (720
extracts to equilibrate to room temperature. For re-use / re- seconds).
Release date: 2019-12-20 4/42 Quantum Blue® fCAL extended• For low / high controls: Repeat step 3.1 with 60 µL is detectable after 12 minutes of incubation time (figure
controls instead of diluted stool extract. 1B), the calprotectin concentration present in the stool
sample is calculated by the Quantum Blue® Reader.
• If only the test line (T) is detectable after 12 minutes of
incubation time (figure 1C), the test result is invalid and
the assay has to be repeated using another test
cassette.
• If neither the control line (C) nor the test line (T) are
detectable after 12 minutes of incubation time (figure
1D), the test result is invalid and the assay has to be
repeated using another test cassette.
• As the Quantum Blue® Reader allows a quantitative
evaluation of the test (T) and control (C) lines, an
additional validity check of the control line (C) is
3.2. Method without internal timer undertaken. If the signal intensity of the control line (C)
• Use the white RFID chip card. is below a threshold after 12 minutes of incubation time,
• Add 60 µL of diluted stool extract onto the sample the test result is also invalid and the assay has to be
loading port of the test cassette. repeated using another test cassette.
• Incubate for 12 minutes +/- 1 minute (set a timer
manually).
STANDARDIZATION
• Load the test cassette onto the test cassette holder of • The Quantum Blue® fCAL extended is standardized with
the reader. the BÜHLMANN fCAL® ELISA (order code: EK-CAL).
• Scan the test cassette with the Quantum Blue® Reader • The Quantum Blue® Reader uses a lot-specific standard
by pressing the start button immediately. curve to calculate the calprotectin concentration. The
assay range is between 30 and 1000 µg/g.
• For low / high controls: Repeat step 3.2 with 60 µL of
controls instead of diluted stool extract. • To receive quantitative results for calprotectin
concentration between 850-1800 µg/g, high samples
reading above 850 µg/g can be re-tested with the
BÜHLMANN Quantum Blue® high range test (order
code: LF-CHR25).
LIMITATIONS
• Reagents delivered with the BÜHLMANN Quantum
Blue® fCAL extended kit are intended for the
determination of calprotectin levels in human stool
samples only.
Remark: Please refer to the Quantum Blue® Reader • Fecal calprotectin values are intended as an aid to
manual to learn more about the basic functions and how to diagnosis in distinguishing organic disease from
initialize and operate the reader, especially how to select functional disease and as an aid to IBD monitoring.
test methods, and how to load lot specific parameters from Results should always be interpreted in combination
the RFID chip card on the Quantum Blue® Reader. with other clinical and laboratory findings.
• For IBD disease monitoring, multiple fecal calprotectin
QUALITY CONTROL measurements performed at up to 4 weeks intervals
have been suggested to have best diagnostic accuracy
• If the performance of the assay does not correlate with in predicting clinical relapse in patients (ref. 19-20).
the established limits and repetition excludes errors in
• In rare cases, when calprotectin levels are extremely
technique, check the following issues: i) pipetting,
high (above 4000 μg/g, ie. in acute UC), the test system
temperature controlling and timing ii) expiration dates of
may be prone to a high dose hook effect, that can result
reagents and iii) storage and incubation conditions.
in values below the expected 850 μg/g upper limit of the
• The result of the self-test of the Quantum Blue® Reader linear range. It is advised to give particular attention to
performed at startup has to be valid. results above 300 μg/g when accompanied by strong
symptoms, which could indicate acute inflammation. In
VALIDATION OF RESULTS this case retesting of a patient’s stool sample by a
laboratory in timely manner is recommended for
• For a valid test result, the control line (C) must be visible
confirmation.
in any case (see figures 1A and 1B). It is used as
functional test control only and cannot be used for the • Patients who are taking NSAIDs regularly may have
interpretation of the test line (T). If the test line (T) is not elevated fecal calprotectin levels.
detectable after 12 minutes of incubation time (figure • Results may not be clinically applicable to children less
1A), the concentration of calprotectin present in the than 4 years of age who have mildly increased fecal
stool sample is below the detection limit. If a test line (T) calprotectin levels (ref. 21-24).
Release date: 2019-12-20 5/42 Quantum Blue® fCAL extendedINTERPRETATION OF RESULTS A clinical sensitivity of 93.3% at 80 µg/g and a clinical
specificity of 83.7% at 160 µg/g, can be reached in the
I. Distinguishing organic disease from functional differentiation between IBD and GI-related non-
gastrointestinal disease inflammatory conditions, including IBS. ROC curve analysis
The determination of fecal calprotectin levels can be used resulted in an AUC of 0.923 (refer to table 5).
as a reliable and simple aid in distinguishing organic from A clinical sensitivity of 93.3% at 80 µg/g and a clinical
functional gastrointestinal diseases (ref. 1-7). specificity of 85.4% at 160 µg/g, can be reached in the
The result categories are based on data from clinical differentiation between IBD and IBS. ROC curve analysis
studies performed by BÜHLMANN and are BÜHLMANN’s resulted in an AUC of 0.933 (refer to table 6).
recommendations. All test results should be interpreted in The optimal cut-off combination for these patient pools
conjunction with information available from the patient’s could be defined by ROC analysis at 80 µg/g and 160 µg/g
clinical symptoms, medical history, and other clinical and calprotectin, which is slightly more stringent than a
laboratory findings. combination of a more sensitive lower cut-off of 50 µg/g
Clinical thresholds with lower performance in specificity, and an upper cut-off
of 200 µg/g with slightly lower sensitivity (table 7 and 8).
The following data were established with the BÜHLMANN
fCAL® ELISA (order code: EK-CAL). II. IBD monitoring
Results from 58 clinical samples from patients diagnosed Clinical thresholds and evaluation
with IBS and 131 clinical samples from patients diagnosed The determination of fecal calprotectin is also a reliable and
with IBD, from an international clinical study, were analyzed simple way to assist the monitoring of IBD patients
to obtain the values described in table 3. (ref. 7-18).
Calprotectin Correlation of calprotectin levels and the inflammatory
Interpretation Follow-up
concentration status of patients’ intestinal mucosa, according to
< 80 µg/g Normal None endoscopic evaluations, was determined in three
independent studies using BÜHLMANN calprotectin tests
Follow-up within 4 – 6
80 - 160 µg/g Gray-zone/Borderline (table 9). The diagnostic value of calprotectin in predicting
weeks
clinical remission and relapse, according to patient`s
> 160 µg/g Elevated Repeat as needed
symptoms, clinical activity indices, unplanned need for
Table 3 therapy escalation, hospitalization or emergency was
Calprotectin values below 80 μg/g determined in three studies using BÜHLMANN calprotectin
Fecal calprotectin values 160 µg/g are indicative of indicate the necessity of tighter control in the following
neutrophil infiltrate in the gastrointestinal tract; therefore, period to assess disease development tendencies.
this may signal the presence of active inflammatory Calprotectin values above 300 µg/g:
disease. Appropriate further investigative procedures by Fecal calprotectin levels above 300 µg/g should be
specialists are suggested to achieve an overall clinical repeated and, if raised levels are confirmed, prompt further
diagnosis. investigative procedures (ref. 7-18).
Clinical evaluation
The ability of the BÜHLMANN fCAL® ELISA to discriminate
between patients with IBD and other non-inflammatory GI
disorders, including IBS, was tested in a clinical study with
a total of 337 adult and pediatric patients. One hundred and
thirty five (135) patients had a final diagnosis of IBD
(Crohn’s disease, ulcerative colitis or indeterminate colitis),
130 patients suffered from IBS and 72 patients presented
with abdominal pain and/or diarrhea, or other GI-related
non-inflammatory conditions (refer to table 4). Final
diagnosis was supported by endoscopic as well as other
clinical findings.
Release date: 2019-12-20 6/42 Quantum Blue® fCAL extendedPERFORMANCE CHARACTERISTICS Limit of Quantification (LoQ):
Lower LoQ: ≤30 (28.2) µg/g calprotectin.
Method comparison
Upper LoQ: ≥1000 (1002) µg/g calprotectin.
Bias at clinical decision points:
The LoQ was established according to CLSI guideline
50 μg/g: 10.6% (95% CI: -2.1-36%)
EP17-A. To determine the lower LoQ, four extracted stool
200 μg/g: -2.2% (95% CI: -4.9-4.7%) samples with calprotectin concentrations ranging from 19.1
100 μg/g: 2.1% (95% CI: -2.7-14%) to 37.3 µg/g were measured in ten replicates to produce 40
300 μg/g: -3.6% (95% CI: -7.0-2.3%) values (table 14). To determine the upper LoQ, four
extracted stool samples with calprotectin concentrations
The method comparison study was performed according to
ranging from 628 to 1001.7 µg/g were measured in ten
the CLSI guideline EP09-A3. One hundred and eighty six
replicates to produce 40 values (table 15). The study was
(186) extracted clinical stool samples were measured
performed with two different test cassette lots. Reference
according to the instruction for use with the Quantum Blue®
calprotectin values of extracted stool samples were
fCAL extended test and with the BÜHMANN fCAL® ELISA.
determined with the BÜHLMANN fCAL® ELISA. The
Measurements were performed over three days using three
Quantum Blue® fCAL extended test cassette lots (figure 2). relative total error was calculated using the RMS model
from estimates of precision and bias to the reference
Recovery: 102%-121% values, for each sample. The LoQ was defined as the
Six stool specimen extracts were spiked with 150 μg/g lowest and highest sample concentration, for the lower LoQ
calprotectin in calibrator material of human serum origin. and upper LoQ, respectively, which met the acceptance
The baseline extract was spiked with the corresponding criterion of 30% relative total error.
amount of extraction buffer. Baseline and spiked samples Linearity: 30-850 μg/g
were measured in eight replicates. One test cassette lot
was used. The results are summarized in table 11. The linear range of the Quantum Blue® fCAL extended
assay was determined according to CLSI guideline EP06-
Repeatability: 15.3-19.1% CV A. Two extracted stool samples with low and high
Within-laboratory precision: 18.0-23.0% CV calprotectin concentrations were blended to obtain a total
Repeatability and within-laboratory precision were of 14 concentration levels covering and exceeding the
determined according to CLSI guideline EP05-A2. Four expected measuring range. The blends were assayed in
extracted stool samples, including extracts with calprotectin ten replicates on two test cassette lots. Mean calprotectin
levels close to clinical decision points, were measured over concentration values of each blend were plotted against the
ten days, in two independent runs each day, with two dilution factor used to obtain the blend. Linear as well as
replicates per run. A single reagent lot was used (table 12). second and third order polynomial fitting was applied.
Where coefficients of the second and third order polynomial
Inter-lot precision: 16.5-20.6% CV fits were determined to be significant, the linear range was
Inter-lot precision was determined according to CLSI defined as the interval of calprotectin concentration in
guideline EP05-A2. Four extracted stool samples, including which deviation from the linear fit did not exceed 20%
extracts with calprotectin levels close to clinical decision relative concentration value or 20 μg/g (figure 3).
points, were measured using three different reagent lots.
High dose hook effect
The measurements were performed over five days, in a
single run each day, with two replicates per run (table 13). No high dose hook effect was observed for calprotectin
concentrations up to 1500 µg/g. Decrease in mean signal
Limit of Blank (LoB): 6.7 µg/g calprotectin. below the 850 μg/g upper linear range limit was estimated
The LoB was established according to CLSI guideline for calprotectin concentrations above 4000 μg/g. No value
EP17-A using extraction buffer to obtain 60 blank values. below the highest clinical decision point of 300 µg/g was
The study was performed with two different test cassette observed for any of the single replicate results for all high
lots. samples tested. Seven to eight extracted stool samples
with calprotectin concentrations ranging from 1361 µg/g to
Limit of Detection (LoD): 18 µg/g calprotectin.
13`817 µg/g were measured in five replicates on three
The LoD was established according to CLSI guideline different test cassette lots.
EP17-A. Two extracted stool samples with calprotectin
concentrations of 58 and 62 μg/g were diluted in extraction
buffer to obtain a total of six samples with concentrations
ranging from 1 x LoB (6.3 µg/g) to 4 x LoB (25.1 µg/g). The
samples were measured in ten replicates to obtain 60
values. The study was performed with two different test
cassette lots.
Release date: 2019-12-20 7/42 Quantum Blue® fCAL extendedDEUTSCH REAGENZIEN & MATERIAL ZUSÄTZLICH
ERHÄLTLICH
ANWENDUNGSZWECK Stuhlextraktionprodukte
Der BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended ist ein in Extraktionsprodukte zur Stuhlextraktion werden nicht mit
vitro-Diagnosetest für die quantitative Bestimmung von diesem Kit mitgeliefert und müssen zusätzlich zum Kit
Calprotectin in humanen Stuhlproben, der als Hilfsmittel bei bestellt werden.
der Beurteilung von Darmschleimhautentzündung dient. Extraktions-
Menge Art.-Nr.
Die Testergebnisse dienen bei der Diagnose als Hilfsmittel produkt Kits
zur Unterscheidung zwischen organischen, entzündlichen Packungen mit 50, 200 oder
Erkrankung des Magen-Darm-Traktes (entzündliche 500 Röhrchen erhältlich, B-CALEX-C50
Darmerkrankungen (CED), speziell Morbus Crohn oder CALEX® Cap gefüllt mit 5 mL B-CALEX-C200
Extraktionspuffer B-CALEX-C500
Colitis ulcerosa (UC)) und funktionellen Erkrankungen Gebrauchsfertig
(Reizdarmsyndrom (RDS)) (Ref. 1-7) bei Patienten mit
chronischen Bauchschmerzen und als Hilfsmittel bei der 50 Röhrchen bestehend aus
Smart-Prep B-CAL-RD
Spatel und Böden
Überwachung der CED (Ref. 7-18).
Für den Laborgebrauch. 50 Röhrchen bestehend aus
Röhrchen, Konus und
Europa: Für den professionellen Gebrauch. ScheBo® Quick- Dosierspitze,
B-CAL-SO50
Prep™ gefüllt mit 1.3 mL
PRINZIP DER METHODE Extraktionspuffer
Gebrauchsfertig
Das Testprinzip beruht auf der selektiven Messung von Tabelle 2
Calprotectin mittels eines Sandwich Immunoassays. Ein
monoklonaler Fangantikörper (mAk), der hoch spezifisch
NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE
für Calprotectin ist, wird auf eine Testmembran gebunden.
ERFORDERLICHE MATERIALIEN
Ein zweiter monoklonaler Nachweisantikörper, welcher mit
Goldkolloiden konjugiert ist, wird auf dem „Conjugate • Vortex Mischer für die Stuhlextraktion
Release Pad“ aufgebracht. Nach der Zugabe der • Präzisionspipetten mit Einwegspitzen: 10-100 µL,
extrahierten und verdünnten Stuhlprobe wird er in das 100-1000 µL und 250-2500 µL
Reaktions-System freigesetzt. Der Calprotectin / Anti-
Calprotectin-Goldkonjugat Komplex bindet an den auf der • Zentrifuge
Membran gebundenen Anti-Calprotectin Antikörper • 5 mL Polypropylen oder Polystyrol Einwegröhrchen zur
(Testlinie; Testbande). Das verbleibende nicht gebundene Durchführung von Extraktverdünnung
Anti-Calprotectin-Goldkonjugat wird von einem Ziege-Anti- • Laborwecker (optional)
Maus Antikörper gebunden, welcher ebenfalls auf die
Membran gebunden wurde (Kontrollinie; Kontrollbande). • Quantum Blue® Reader bei BÜHLMANN erhältlich
(Art.-Nr.: BI-POCTR-ABS)
Die Signalintensität der Testbande (T) und der
Kontrollbande (C) wird durch den BÜHLMANN Quantum • Papiertücher und Fliesspapier
Blue® Reader quantifiziert.
VORSICHTSMASSNAHMEN
GELIEFERTE REAGENZIEN UND VORBEREITUNG Sicherheitsmassnahmen
Reagenz Menge Art.-Nr. Kommentar • Die Kontrollen enthalten Bestandteile humanen
Vakuumdicht In Ursprungs. Obwohl sie negativ in Tests für HBV
B-LFCALUS-
Testkassette 25 Stück
TC
einem Oberflächenantigen, HCV und HIV1/2 Antikörper waren,
Folienbeutel sollten sie gemäss Guter Laborpraxis (GLP) als
Extraktionspuffer
1 Flasche,
B-CAL-EX Gebrauchsfertig
potentiell infektiös behandelt werden und die
125 mL entsprechenden Sicherheitsvorkehrungen getroffen
Kontrollen 2 Fläschchen, B-CALE- werden.
Gebrauchsfertig
tief* / hoch* 0,5 mL CONSET
• Alle Patientenproben sollten gemäss Guter Laborpraxis
RFID Chipkarte 1 Stück B-CALE-RCC
Weisse (GLP) als potentiell infektiös behandelt werden und die
Plastikkarte
entsprechenden Sicherheits-vorkehrungen sollten
B-CALE- Grüne getroffen werden.
RFID Chipkarte 1 Stück
RCC720 Plastikkarte
• Reagenzien: Kontakt der Reagenzien mit der Haut, den
Tabelle 1
Augen oder den Schleimhäuten vermeiden. Im Falle
* Die Kontrollen enthalten lotspezifische Konzentrationen von nativem,
humanem Calprotectin. Die genauen Konzentrationen werden auf dem eines Kontaktes sofort mit reichlich Wasser spülen,
QC Datenblatt angegeben. ansonsten kann eine Reizung auftreten.
• Die Reagenzien und Chemikalien müssen gemäss den
LAGERUNG UND HALTBARKEIT DER REAGENZIEN nationalen Richtlinien und Bestimmungen als
Sämtliche Kitkomponenten sind bei 2-8 °C bis zum gefährlicher Abfall behandelt werden.
angegebenen Ablaufdatum haltbar.
Release date: 2019-12-20 8/42 Quantum Blue® fCAL extendedTechnische Vorsichtsmassnahmen Lagerung des Extraktes
Fäkales Calprotectin in Extrakten, die mit dem CALEX®
Kitkomponenten
Cap gewonnen wurden, ist bei Raumtemperatur 3 Tage
• Sämtliche Reagenzien und Proben müssen vor der und bei 2-8 °C bis zu 6 Tage stabil. Bei längerer Lagerung,
Testdurchführung auf Raumtemperatur (18-28 °C) die Extrakte bei -20 °C einfrieren. Gefrorene Extrakte sind
gebracht werden. für einen Zeitraum von bis zu 23 Monaten stabil.
• Die Reagenzien vor dem Gebrauch gut mischen CALEX® Cap Extrakte können direkt im CALEX® Cap
(Vortex). gelagert und gefroren werden. Die Extrakte können vier
• Die Reagenzien dürfen nach Ablauf des Verfallsdatums Einfrier/ Auftau-Zyklen ausgesetzt werden. Vor der
Messung die gefrorenen Extrakte auf Raumtemperatur
nicht mehr verwendet werden.
äquilibrieren lassen. Zur Weiterverwendung der Extrakte
• Mischen Sie nicht die Reagenzien verschiedener Kit siehe Schritt 2 unter dem Kapitel Testdurchführung.
Lots. Calprotectin-Stuhlextrakte, die mit der manuellen
• Die Testkassetten dürfen nicht wiederverwendet Wiegemethoden, wie BÜHLMANN Smart-Prep oder
werden. ScheBo® Quick-Prep™, gewonnen wurden, sind bei 2-8 °C
für ≤7 Tage oder bei –20 °C für 36 Monate stabil.
Testablauf
• Lesen Sie die Testanleitung vor der Testdurchführung
TESTDURCHFÜHRUNG
sorgfältig durch. Die Leistungsdaten können negativ
beeinflusst werden, wenn Reagenzien nicht korrekt Der Arbeitsablauf gliedert sich in drei Schritte:
verdünnt, behandelt oder unter Bedingungen gelagert
1. Extraktion der Stuhlproben:
werden, die von der beschriebenen Arbeitsanleitung
abweichen. Die Extraktion ist in der Arbeitsanleitung des gewählten
• Vor Testbeginn muss der Quantum Blue®
Reader Extraktionsröhrchens beschrieben.
eingeschaltet und für den Quantum Blue® fCAL CALEX® Cap: Flüssige Stuhlproben können direkt in
extended Test programmiert werden: Laden Sie die das CALEX® Cap pipettiert werden. Die blaue Kappe
Testmethode mithilfe der RFID Chipkarte (B-CALE-RCC abschrauben und 10 µL der Stuhlprobe in das Röhrchen
oder B-CALE-RCC720), bevor Sie den Test starten pipettieren. Die Kappe des CALEX® Cap wieder
(siehe Quantum Blue® Reader Handbuch). aufschrauben und mit dem Vortex-Schritt gemäss dem
• Benutzen Sie die RFID Chipkarte, um die Extraktionsverfahren, das in der mit dem CALEX® Cap
testspezifischen Parameter zu ändern. mitgelieferten Gebrauchs-anweisung beschrieben und
abgebildet ist, fortfahren.
• Unsachgemässe Handhabung der Patientenproben
können zu unbrauchbaren Resultaten führen. 2. Verarbeitung des Extraktes:
• Um verlässliche, quantitative Resultate zu erhalten, ist • Smart-Prep oder ScheBo® Quick PrepTM: Die Extrakte
es wichtig, dass die im Extraktionsröhrchen enthaltene nach der Extraktion 10 Minuten ruhen lassen. Den
Stuhlprobe vollständig homogenisiert wird. Überstand mit Extraktionspuffer 1:10 verdünnen (z.B.
• Es ist wichtig, dass die Extrakte im Smart-Prep oder 50 µL Extrakt + 450 µL Extraktionspuffer). Nach der
ScheBo® Quick-Prep™ vor der Lagerung für 5 Min. bei Verdünnung gut mischen und die Proben vor Gebrauch
3000 x g zentrifugiert werden. Nach der Zentrifugation für mindestens 5 Minuten bei 18-28 °C stehen lassen,
muss der Überstand in ein frisches Röhrchen bevor mit dem nächsten Schritt fortgefahren wird
transferiert werden. (Schritt Nr. 3).
• CALEX® Cap: Die Extrakte nach der Extraktion 10
PROBENENTNAHME UND LAGERUNG Minuten mit dem weissen Verschluss nach unten ruhen
lassen. Öffnen Sie den blauen Verschluss. Der
Für das Extraktionsverfahren werden weniger als 1 g native Überstand kann dann ohne weitere Verdünnung in
Stuhlprobe benötigt. Die Stuhlproben in Röhrchen ohne dem Lateral Flow Testablauf verwendet werden.
Zusatzstoffe füllen.
3. Lateral Flow Testablauf und Quantifizierung
Wichtiger Hinweis: Den Proben dürfen keine chemische
oder biologische Zusatzstoffe beigefügt werden. Es können zwei alternative Methoden von der jeweiligen
RFID-Chipkarte geladen werden. B-CALE-RCC oder B-
Transport der Proben CALE-RCC720. Wählen Sie eine der RFID-Chipkarten vor
Die Stuhlproben sollten innerhalb von 3 Tagen nach der dem Start der Experimente. Laden Sie die testspezifischen
Gewinnung zur Bearbeitung im Labor eingehen. Die Parameter von der RFID Chipkarte auf den Quantum Blue®
Stuhlproben können bei Raumtemperatur oder gekühlt Reader.
versendet werden.
Lagerung der Proben
Die Stuhlproben sollten im Kühlschrank bei 2-8 °C
aufbewahrt und innerhalb von 3 Tagen nach Eingang im
Labor extrahiert werden. Die Proben nicht bei erhöhten
Temperaturen lagern.
Release date: 2019-12-20 9/42 Quantum Blue® fCAL extendedHinweis: Nehmen Sie das Quantum Blue® Reader Manual
zu Hilfe, wenn Sie mehr über die Basisfunktionen
3.1 Methode mit internem Zeitmesser (Inbetriebnahme und Bedienung) erfahren wollen,
• Verwenden Sie die grüne RFID Chipkarte. insbesondere wie Testmethoden ausgewählt werden und
wie lotspezifische Parameter von der RFID Chipkarte auf
• Testkassette auf den Kassettenhalter des Quantum den Quantum Blue® Reader geladen werden.
Blue® Readers laden.
• 60 μL verdünntes Extrakt auf die runde Proben- QUALITÄTSKONTROLLE
autragsstelle der Testkassette aufbringen.
• Falls die Ergebnisse des Tests nicht innerhalb der
• Den Kassettenhalter schliessen und den Startknopf
erwarteten Bereiche liegen und wiederholte Messungen
drücken.
einen Durchführungsfehler ausschliessen, sind folgende
• Der Lesevorgang startet automatisch nach 12 Minuten Bedingungen zu überprüfen: i) Pipetten, Temperatur
(720 Sek.). und Zeitmessung, ii) Verfallsdaten der Reagenzien, iii)
• Für die Kontrollen Tief / Hoch: Wiederholen Sie den Lagerung- und Inkubationsbedingungen.
Schritt 3.1 mit 60 μL Kontrollen anstelle des verdünnten • Der Selbsttest, der beim Einschalten des Quantum
Stuhlextrakts. Blue® Readers durchgeführt wird, muss gültig sein.
VALIDIERUNG DER RESULTATE
• Damit das Testresultat als gültig bewertet wird, muss
die Kontrollbande (C) klar ersichtlich sein (siehe
Abbildungen 1A und 1B). Diese wird nur als
Funktionskontrolle verwendet und kann nicht zur
Interpretation der Testbande (T) benutzt werden. Falls
die Testbande (T) nach 12 Minuten Inkubation nicht
nachweisbar ist (Abbildung 1A), bedeutet dies, dass die
Calprotectinkonzentration im Stuhl nicht nachweisbar
ist. Falls die Testbande (T) nach der Inkubation
nachweisbar ist, wird die Calprotectinkonzentration in
3.2 Methode ohne internen Zeitmesser der Stuhlprobe durch den Quantum Blue® Reader
• Verwenden Sie die weisse RFID Chipkarte. berechnet.
• 60 μL verdünntes Extrakt auf die runde Proben- • Falls nach der Inkubation von 12 Minuten nur die
autragsstelle der Kassette aufbringen. Testbande (T) sichtbar ist (Abbildung 1C), ist das
• Die Testkassette für 12 +/-1 Minuten inkubieren Resultat ungültig und der Test muss mit einer neuen
(einen Wecker manuell einstellen). Testkassette wiederholt werden.
• Testkassette auf den Kassettenhalter des Quantum • Falls weder die Kontrollbande (C) noch die Testbande
Blue® laden (T) nach der Inkubation nach 12 Minuten nicht
nachweisbar sind (Abbildung 1D), ist das Resultat
• Lesevorgang durch sofortiges Drücken auf den
ungültig und der Test muss mit einer neuen
Startknopf starten.
Testkassette wiederholt werden.
• Für die Kontrollen Tief / Hoch: Wiederholen Sie den
• Da der Quantum Blue® Reader eine quantitative
Schritt 3.2 mit 60 μL Kontrollen anstelle des verdünnten
Bestimmung der Test (T) und der Kontrollbande (C)
Stuhlextrakts.
erlaubt, wird eine zusätzliche Validitätsprüfung
durchgeführt. Falls die Signalintensität der
Kontrollbande (C) nach der Inkubation von 12 Minuten
einen bestimmten Wert unterschreitet, ist das Resultat
ungültig und der Test muss mit einer neuen
Testkassette wiederholt werden.
Release date: 2019-12-20 10/42 Quantum Blue® fCAL extendedSTANDARDISIERUNG anderen klinischen Ergebnissen und Laborbefunden
verfügbar sind, interpretiert werden.
• Der Quantum Blue® fCAL extended wurde mit Hilfe des
BÜHLMANN fCAL® ELISA (Art.-Nr.: EK-CAL) Klinische Schwellenwerte
standardisiert. Die folgenden Daten wurden mit dem BÜHLMANN fCAL®
• Der BÜHLMANN Quantum Blue® Reader verwendet für ELISA erhoben (Bestellcode: EK-CAL).
die Berechnung der Calprotectinkonzentration eine lot- Ergebnisse aus 58 klinischen Proben von mit RDS
spezifische Standardkurve. Der messbare Bereich liegt diagnostizierten Patienten und aus 131 klinischen Proben
zwischen 30 und 1000 µg/g. von mit CED diagnostizierten Patienten aus einer
internationalen klinischen Studie wurden herangezogen,
• Um quantitative Ergebnisse für die Calprotectin- um die in Tabelle 3 angegebenen Werte zu erhalten.
konzentrationen zwischen 850-1800 μg/g zu erhalten,
können hohe Proben, die über 850 μg/g anzeigen, mit
Calprotectin-
dem BÜHLMANN Quantum Blue® high range Test Interpretation Nachuntersuchung
konzentration
(Bestellcode: LF-CHR25) erneut getestet werden.
< 80 µg/g Normal Keine
Grauzone/ Nachbeobachtung innerhalb
EINSCHRÄNKUNGEN 80 – 160 µg/g
grenzwertig von 4-6 Wochen
• Die mit dem Quantum Blue® fCAL extended Kit > 160 µg/g Erhöht Bei Bedarf wiederholen
bereitgestellten Reagenzien sind nur für die Tabelle 3
Bestimmung der Calprotectinkonzentrationen in Calprotectinwerte unterhalb 80 μg/g
humanen Stuhlproben vorgesehen. Calprotectinwerte im Stuhl 160 µg/g deuten auf eine
Aufmerksamkeit auf Resultate oberhalb von 300 μg/g zu neutrophile Infiltration des gastrointestinalen Traktes hin;
legen, wenn sie mit starken Symptomen einhergehen, daher kann dies ein Zeichen dafür sein, dass eine aktive
was eine akute Entzündung anzeigen könnte. In diesem entzündliche Erkrankung vorliegt. Entsprechende
Falle wird für die Bestätigung eine zeitnahe erneute weiterführende Untersuchungen durch Fachärzte zur
Messung der Patientenstuhlprobe empfohlen. Erhaltung einer klinischen Gesamtdiagnose werden
• Patienten, die regelmässig NSAID einnehmen, könnten empfohlen.
erhöhte fäkale Calprotectinkonzentrationen aufweisen.
Klinische Beurteilung
• Die Ergebnisse sind unter Umständen nicht klinisch Die Fähigkeit des BÜHLMANN fCAL® ELISA zwischen
anwendbar auf Kinder unter 4 Jahren, die leicht erhöhte Patienten mit CED und anderen nichtentzündlichen GI-
Calprotectinspiegel im Stuhl aufweisen (Ref. 21-24). Erkrankungen einschliesslich RDS zu unterscheiden,
wurde in einer klinischen Studie mit insgesamt 337
INTERPRETATION DER ERGEBNISSE erwachsenen und pädiatrischen Patienten untersucht.
I. Unterscheiden einer organischen Erkrankung von Einhundertfünfunddreissig (135) Patienten hatten die
einer funktionellen gastrointestinalen Erkrankung endgültige Diagnose einer CED (Morbus Crohn, Colitis
ulcerosa oder unklare Colitis), 130 Patienten hatten RDS
Die Bestimmung des Calprotectinspiegels in Stuhlproben und 72 Patienten stellten sich mit Bauchschmerzen
kann als zuverlässige und einfache Hilfe bei der und/oder Durchfall bzw. anderen GI-assoziierten
Unterscheidung zwischen organischen und funktionellen nichtentzündlichen Erkrankungen vor (siehe Tabelle 4). Die
gastrointestinalen Erkrankungen verwendet werden endgültige Diagnose wurde durch Endoskopie sowie
(Ref. 1-7). andere klinische Befunde gestützt.
Die Ergebniskategorien basieren auf Daten aus klinischen
Die Differenzierung zwischen CED und GI-assoziierten
Studien, die von BÜHLMANN durchgeführt wurden, und
nichtentzündlichen Erkrankungen einschliesslich RDS
sind Empfehlungen von BÜHLMANN. Alle Testergebnisse
wurde mit einer klinischen Empfindlichkeit von 93,3% bei
sollten zusammen mit Informationen, die aus den
80 µg/g und einer klinischen Spezifität von 83,7% bei
klinischen Symptomen des Patienten, der Anamnese und
Release date: 2019-12-20 11/42 Quantum Blue® fCAL extended160 µg/g erreicht. Die ROC-Kurvenanalyse ergab einen LEISTUNGSMERKMALE
AUC von 0,923 (siehe Tabelle 5).
Methodenvergleich
Die Differenzierung zwischen CED und RDS wurde mit
einer klinischen Empfindlichkeit von 93,3% bei 80 µg/g und Bias an den klinischen Entscheidungspunkten:
einer klinischen Spezifität von 85,4% bei 160 µg/g erreicht. 50 μg/g: 10,6% (95% CI: -2,1-36%)
Die ROC-Kurvenanalyse ergab einen AUC von 0,933 200 μg/g: -2,2% (95% CI: -4,9-4,7%)
(siehe Tabelle 6). 100 μg/g: 2,1% (95% CI: -2,7-14%)
Die durch ROC-Analyse definierte optimale Kombination 300 μg/g: -3,6% (95% CI: -7,0-2,3%)
von Toleranzgrenzen für diese Patientenpopulationen Die Methodenvergleichsstudie wurde gemäss der CLSI-
betrug 80 µg/g und 160 µg/g Calprotectin, welches etwas Richtlinie EP09-A3 durchgeführt.
stringenter ist als die Kombination einer empfindlicheren Einhundertsechsundachzig 186 extrahierte klinische
unteren Toleranzgrenze von 50 µg/g mit geringerer Stuhlproben wurden entsprechend der Gebrauchs-
Spezifitätsleistung und einer oberen Toleranzgrenze von anweisung mit dem Quantum Blue® fCAL extended und
200 µg/g mit etwas geringerer Empfindlichkeit dem BÜHMANN fCAL® ELISA Test gemessen. Die
(Tabelle 7 und 8). Messungen wurden an drei Tagen mit drei Testkassetten-
Lots für den Quantum Blue® fCAL extended Test
II. CED-Überwachung durchgeführt (Abbildung 2).
Klinische Schwellenwerte und Beurteilung Wiederfindung: 102%-121%
Die Bestimmung von Calprotectin im Stuhl ist eine Sechs Stuhlprobenextrakte wurden mit 150 μg/g
zuverlässige und einfache Hilfe bei der Überwachung von Calprotectin in Kalibratormaterial aus humanem Serum
CED-Patienten (Ref. 7-18). aufgestockt. Das ursprüngliche Extrakt wurde mit der
Die Korrelation von Calprotectin-Spiegeln und dem entsprechenden Menge an Extraktionspuffer aufgestockt.
Entzündungszustand der Darmschleimhaut von Patienten Ursprüngliche und aufgestockte Proben wurden in acht
gemäss endoskopischer Untersuchungen wurde in drei Replikaten gemessen. Es wurde ein Testkassetten-Lot
unabhängigen Studien mithilfe von BÜHLMANN verwendet. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 11
Calprotectin Tests bestimmt (Tabelle 9). zusammengestellt.
Die diagnostische Aussagekraft von Calprotectin bei der
Vorhersage von klinischen Remissionen und Rezidiven Präzision (Wiederholbarkeit): 15,3-19,1% CV
gemäss Patientensymptomen, die klinischen
Präzision innerhalb des Labors (within-laboratory
Aktivitätsindizes sowie der ungeplante Bedarf für eine
precision): 18,0-23,0% CV
Therapieeskalation, Hospitalisierung oder einen Notfall
wurde in drei Studien mithilfe von BÜHLMANN Calprotectin Die Wiederholpräzision und Präzision innerhalb des Labors
Tests bestimmt (Tabelle 10). wurden nach der CLSI-Richtlinie EP05-A2 durchgeführt.
Die dargestellten Ergebniskategorien sind Empfehlungen Vier extrahierte Stuhlproben, einschliesslich Extrakten mit
und ihre Erstellung basiert auf den zusammengefassten Calprotectinwerten nahe an klinischen Entscheidungs-
Erkenntnissen der publizierten Toleranzgrenzen und punkten, wurden über 10 Tage in zwei unabhängigen
klinischen Leistungsstudien. Es ist angeraten, dass Ärzte Testläufen täglich mit zwei Replikaten pro Messung
individuelle Patienten-Schwellenwerte durch Bestimmung gemessen. Dabei wurde ein einzelnes Reagenzienlot
des Calprotectin-Spiegelausgangswerts des Patienten verwendet (Tabelle 12).
während der Krankheitsremission festlegen. Inter-Lot-Präzision: 16,5-20,6% CV
Calprotectin-Werte unterhalb 100 μg/g Die Inter-Lot-Präzision wurde gemäss der CLSI-Richtlinie
Calprotectin-Spiegel im Stuhl unterhalb 100 µg/g können EP05-A2 durchgeführt. Vier extrahierte Stuhlproben,
Patienten mit niedrigem Risiko eines klinischem Rezidivs in einschliesslich Extrakten mit Calprotectinkonzentrationen
endoskopischer Remission verlässlich identifizieren. nahe an klinischen Entscheidungspunkten, wurden mit drei
Invasive endoskopische Verfahren können bei diesen unterschiedlichen Reagenzienlots gemessen. Die
Patienten vermieden werden (Ref. 7-18). Messungen wurden über fünf Tage in einem Testlauf
täglich mit zwei Replikaten pro Messung durchgeführt
Calprotectinwerte zwischen 100 und 300 μg/g (Tabelle 13).
Calprotectin-Spiegel im Stuhl von 100 bis 300 µg/g können
Limit of Blank (LoB): 6,7 µg/g Calprotectin.
auf die Notwendigkeit einer engmaschigeren Überwachung
im folgenden Zeitraum hinweisen, um Tendenzen der Der LoB-Wert wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A
Krankheitsentwicklung zu beurteilen. mit Extraktionspuffer bestimmt um 60 Blankwerte zu
erhalten. Die Studie wurde mit zwei Testkassetten-Lots
Calprotectinwerte oberhalb 300 μg/g durchgeführt.
Bei Calprotectinspiegeln im Stuhl von über 300 µg/g sollte
Limit of Detection (LoD): 18 µg/g Calprotectin.
die Bestimmung wiederholt und bei Bestätigung erhöhter
Spiegel weitere Untersuchungsverfahren veranlasst Der LoD-Wert wurden gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A
werden (Ref. 7-18). bestimmt. Zwei extrahierte Stuhlproben mit
Calprotectinkonzentrationen von 58 und 62 µg/g wurden in
Extraktionspuffer verdünnt, um insgesamt sechs Proben
mit Konzentrationen zwischen 1 x LoB (6,3 µg/g) und 4 x
LoB (25,1 µg/g) zu erhalten. Die Proben wurden in zehn
Release date: 2019-12-20 12/42 Quantum Blue® fCAL extendedReplikaten gemessen um 60 Werte zu erhalten. Die Studie wurde mit zwei Testkassetten-Lots durchgeführt. Limit of Quantification (LoQ) Unterer LoQ: ≤30 (28,2) µg/g Calprotectin. Oberer LoQ: ≥1000 (1002) µg/g Calprotectin. Der LoQ-Wert wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A bestimmt. Um den unteren LoQ-Wert zu bestimmen, wurden vier extrahierte Stuhlproben mit Calprotectin- konzentrationen zwischen 19,1 und 37,3 µg/g in zehn Replikaten gemessen um 40 Werte zu erhalten (Tabelle 14). Um den oberen LoQ-Wert zu bestimmen, wurden fünf extrahierte Stuhlproben mit Calprotectinkonzentrationen zwischen 628 und 1001,7 µg/g in zehn Replikaten gemessen um 40 Werte zu erhalten (Tabelle 15). Die Studie wurde mit zwei Testkassetten-Lots durchgeführt. Referenzwerte für Calprotectin für die extrahierten Stuhlproben wurden mit dem BÜHLMANN fCAL® ELISA bestimmt. Unter Verwendung des RMS- Modells, das aus den Präzisions- und Abweichungsschätzungen für jede Probe hervorging, wurde der relative Gesamtfehler berechnet. Der LoQ wurde als die niedrigste und höchste Probenkonzentration definiert, für den unteren und oberen LoQ-Wert, der für das Akzeptanzkriterium von 30% relativen Gesamtfehlers erhalten wurde. Linearität: 30-850 μg/g Der lineare Bereich des Quantum Blue® fCAL extended Tests wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP06-A durchgeführt. Um insgesamt 14 Konzentrationsstufen zu erhalten, die den erwarteten Messbereich abdecken und höher sind, wurden zwei extrahierte Stuhlproben, mit niedriger und hoher Calprotectinkonzentration, gemischt. Die Mischungen wurden mit jeweils zehn Replikaten auf zwei Testkassetten-Lots gemessen. Gemittelte Werte der Calprotectinkonzentrationen wurden für jede Mischung gegen den Verdünnungsfaktor aufgetragen, der zur Herstellung der Mischungen verwendet wurde. Es wurde sowohl eine lineare Anpassung als auch eine polynomiale Anpassung zweiter und dritter Ordnung angewendet. Wenn Koeffizienten der polynomialen Anpassung eines Polynoms der zweiten und dritten Ordnung als signifikant bestimmt wurden, wurde der lineare Bereich als das Intervall der Calprotectinkonzentration bestimmt, in dem eine Abweichung von der linearen Anpassung, 20% des relativen Konzentrationswerts bzw. 20 μg/g nicht überschreitet (Abbildung 3). High-Dose-Hook Effekt Bei Calprotectinkonzentrationen bis zu 1500 µg/g wurde kein High-Dose-Hook Effekt beobachtet. Eine Abnahme des gemittelten Signals unter die obere lineare Bereichslimite von 850 μg/g wurde für Calprotectin- konzentrationen über 4000 μg/g abgeschätzt. Es wurde für keines der einzelnen Replikatmessungen ein Wert unterhalb des höchsten klinischen Entscheidungs- punktes von 300 µg/g beobachtet. Sieben bis acht extrahierte Stuhlproben mit Calprotectinkonzentrationen zwischen 1361 µg/g und 13`817 µg/g wurden in fünf Replikaten auf drei Testkassetten-Lots gemessen. Release date: 2019-12-20 13/42 Quantum Blue® fCAL extended
FRANÇAIS STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
DES RÉACTIFS
UTILISATION PRÉVUE Tous les composants du kit sont stables à 2-8 °C jusqu'à la
Le BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended est un test date d’expiration imprimée sur les étiquettes.
de diagnostic in vitro pour la détermination quantitative de
la calprotectine dans les prélèvements de selles humains REACTIFS ET MATERIEL FOURNIS SELON
destiné à aider à l’évaluation de l’inflammation de la LA DEMANDE
muqueuse intestinale. Les résultats du dosage peuvent
Dispositifs d'extraction de selles
aider au diagnostic différenciant une maladie inflammatoire
organique du tractus gastro-intestinal (maladie Les tubes d'extraction de selles décrits ci-après ne sont
inflammatoire chronique de l’intestin ou MICI, pas inclus dans le kit. Ils peuvent être commandés en
spécifiquement maladie de Crohn ou rectocolite même temps que le kit.
hémorragique, RCH) d'une maladie fonctionnelle Kits de dispositifs
Quantité Code
(syndrome du côlon irritable ou SCI) (réf. 1-7), chez les d’extraction
patients souffrant de douleurs abdominales chroniques et Paquets de 50, 200 ou
peuvent également aider au suivi d’une MICI (réf. 7-18). 500 tubes disponibles, B-CALEX-C50
Tube d’extraction chaque tube contenant
Pour utilisation en laboratoire uniquement. CALEX® Cap 5 mL de tampon B-CALEX-C200
Europe : pour utilisation professionnelle. d’extraction B-CALEX-C500
Prêt à l'emploi
PRINCIPE DU TEST 50 tubes, comprenant
Smart-Prep chacun spatules et fonds B-CAL-RD
Le test permet la mesure sélective de l'antigène de la de tube
calprotectine par un dosage immunologique de type 50 tubes constitués d’un
sandwich. Un anticorps monoclonal de capture (mAb) tube, d’un cône et d’un
hautement spécifique de la calprotectine est déposé sur la ScheBo® Quick- embout doseur, chacun
rempli de 1,3 mL de B-CAL-SO50
membrane test. Un second anticorps monoclonal, conjugué PrepTM
tampon d’extraction
à de l’or colloïdal permettant la détection, est présent sur la
Prêt à l'emploi
bande de libération du conjugué. Il est libéré dans le
système après ajout de l'échantillon de selle extrait et dilué. Tableau 2
Le conjugué calprotectine/anti-calprotectine-or se lie à
l'anticorps anti-calprotectine déposé sur la membrane test MATERIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
(ligne test) et le restant du conjugué or anti-calprotectine • Vortex pour l’extraction des selles
qui n’a pas réagi se lie à l'anticorps de chèvre anti-souris
déposé sur la membrane test (ligne contrôle). Les • Pipettes de précision avec pointes jetables : 10-100 µL,
intensités de signal de la ligne de test (T) et de la ligne de 100-1000 µL et 250-2500 µL
contrôle (C) sont mesurées quantitativement par le • Centrifugeuse
BÜHLMANN Quantum Blue® Reader. • Tubes jetables en polypropylène ou polystyrène de
5 mL pour la préparation des dilutions d’échantillons
REACTIFS FOURNIS ET PREPARATION • Minuteur (facultatif)
Réactifs Quantité Code Commentaires • Quantum Blue® Reader disponible chez BÜHLMANN
Scellée sous (code de commande : BI-POCTR-ABS)
Cassette test 25 pièces B-LFCALUS-TC vide dans un
sachet • Papier absorbant
1 flacon
Tampon d’extraction
125 mL
B-CAL-EX Prêt à l'emploi PRECAUTIONS
Contrôles 2 flacons, Précautions de sécurité
B-CALE-CONSET Prêts à l’emploi
bas* / élevé* 0,5 mL • Les contrôles de cette trousse contiennent des
Carte en composants d’origine humaine. Bien que les tests de
Carte à puce RFID 1 pièce B-CALE-RCC plastique détection de l’antigène de surface du VHB et des
blanche
anticorps des virus VHC et VIH1/2 se soient révélés
Carte en
négatifs, il convient de considérer les réactifs comme
Carte à puce RFID 1 pièce B-CALE-RCC720 plastique
verte
capables de transmettre des maladies infectieuses, et
de les manipuler conformément aux Bonnes Pratiques
Tableau 1
* Les concentrations en calprotectine humaine native des contrôles
de Laboratoire (BPL), en prenant les précautions
varient en fonction des lots. Vous référer à la fiche de contrôle qualité appropriées.
pour les concentrations effectives. • Les échantillons des patients doivent être manipulés en
respectant les Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL)
et avec les précautions requises, comme s'ils étaient
susceptibles de transmettre des infections.
• Réactifs : Éviter le contact des réactifs avec la peau, les
yeux ou les muqueuses. En cas de contact, laver
Release date: 2019-12-20 14/42 Quantum Blue® fCAL extendedimmédiatement et abondamment à l’eau pour éviter tout Conservation des extraits
risque d’irritation. Les extraits de calprotectine fécale obtenus avec le
• Traiter les réactifs et les produits chimiques comme des dispositif CALEX® Cap sont stables à température
déchets dangereux conformément aux lignes directrices ambiante pendant 3 jours et à 2-8 °C jusqu’à 6 jours. Pour
ou aux réglementations de sécurité nationales relatives un stockage plus long, congelez les extraits à
aux substances présentant un risque biologique. -20 °C. Les extraits congelés sont stables pendant une
durée pouvant aller jusqu’à 23 mois.
Précautions techniques Les extraits CALEX® Cap peuvent être directement stockés
Composants du kit et congelés dans le dispositif CALEX® Cap. Les extraits
• Tous les réactifs et échantillons à tester doivent être peuvent être soumis à quatre cycles de congélation-
équilibrés à température ambiante (18-28 °C) avant de décongélation. Avant la mesure, laisser les extraits
démarrer le dosage. congelés s’équilibrer à température ambiante. Pour la
réutilisation / réévaluation des extraits voir l'étape 2 dans le
• Bien mélanger (vortex) les réactifs avant utilisation.
chapitre procédure de dosage.
• Les constituants ne doivent pas être utilisés au-delà de La calprotectine dans les extraits obtenus au moyen de la
la date d'expiration imprimée sur les étiquettes. méthode par pesée manuelle ou au moyen des dispositifs
• Ne pas mélanger des réactifs de lots différents. BÜHLMANN Smart-Prep ou ScheBo® Quick-Prep™ est
• Les cassettes test sont à usage unique. stable à 2-8 °C pendant ≤ 7 jours et à -20 °C pendant
36 mois.
Procédure de test
• Lire attentivement les instructions avant d'effectuer le PROCEDURE DE DOSAGE
test. Les performances du test peuvent se dégrader en
cas de dilution incorrecte des réactifs, ou bien si ces La procédure de dosage se déroule en trois étapes :
derniers sont manipulés ou stockés dans des conditions 1. Extraction des échantillons de selles :
autres que celles spécifiées. La procédure d’extraction est décrite dans le manuel
• Le Quantum Blue® Reader doit être allumé et d’utilisation fourni avec les tubes d’extraction respectifs.
programmé pour le Quantum Blue® fCAL extended : Dispositif CALEX® Cap : Les échantillons de selles
charger la méthode de dosage au moyen de la carte à liquides peuvent être directement pipetés dans le
puce RFID (B-CALE-RCC ou B-CALE-RCC720) , avant dispositif CALEX® Cap. Dévisser le bouchon bleu et
de commencer le dosage (cf. manuel du Quantum pipeter 10 µL d’échantillon de selles dans le dispositif.
Blue® Reader). Reboucher le dispositif CALEX® Cap et passer à l’étape
• Utiliser la carte à puce RFID pour modifier les d’homogénéi-sation au vortex conformément à la
paramètres du test spécifiques pour chaque lot. procédure d’extraction décrite et illustrée dans les
instructions d’utilisation livrées avec le dispositif
• Une manipulation incorrecte des échantillons à tester
CALEX® Cap.
peut entraîner de faux résultats.
• Afin d’obtenir des résultats fiables et quantitatifs, il est 2. Préparation des extraits :
important d'homogénéiser l'échantillon de selle en • Smart-Prep ou ScheBo® Quick Prep™ : après
totalité dans le dispositif d’extraction. extraction, laisser les extraits reposer pendant 10
• Il est important de centrifuger les extraits avec Smart- minutes. Diluer le surnageant au 1/10ème avec du
Prep ou ScheBo® Quick-PrepTM avant de les conserver, tampon d’extraction (par exemple : 50 µL d’extrait et
5 min à 3000 x g. Après centrifugation, le surnageant 450 µL de tampon d’extraction) et bien homogénéiser.
doit être transféré dans un nouveau tube frais de Laisser les échantillons reposer pendant au moins 5
conservation. minutes à température ambiante (18-28 °C) avant de
procéder à la prochaine étape (étape 3).
PRÉLÈVEMENT ET STOCKAGE DES • Tube d’extraction CALEX® Cap : après extraction,
ÉCHANTILLONS laisser reposer les extraits pendant 10 minutes, embout
blanc vers le bas. Dévisser le bouchon bleu. Le
Moins de 1 g d’échantillon primaire de selles est exigé par surnageant peut être utilisé sans autre dilution dans
la procédure d’extraction. Récupérer l’échantillon de selles l'essai en flux latéral.
dans des tubes ordinaires.
3. Dosage en flux latéral et lecture du résultat
Important : l’échantillon doit être collecté sans adjonction
de quelque additif chimique ou biologique que ce soit. Deux méthodes alternatives peuvent être chargées de la
carte à puce RFID respective < B-CALE-RCC > et
Transport des échantillons < B-CALE-RCC720 >. Sélectionner l'une des cartes à puce
Les échantillons de selles doivent être reçus par le RFID avant de procéder au test.
laboratoire en charge du traitement dans les 3 jours qui Charger les paramètres spécifiques au lot de réactif au
suivent la collecte. Les échantillons de selles peuvent être
moyen de la carte à puce RFID sur le Quantum Blue®
expédiés à température ambiante ou réfrigérés.
Reader.
Conservation des échantillons
Les échantillons de selles doivent être réfrigérés à 2-8 °C
et extraits dans les 3 jours qui suivent leur réception par le
laboratoire. Ne pas stocker les échantillons à des
températures élevées.
Release date: 2019-12-20 15/42 Quantum Blue® fCAL extendedYou can also read
